PrimeSTAR^® HS (Premix)

本製品は、タカラバイオが独自に開発したHigh Fidelity PCR酵素であるPrimeSTAR HS DNA Polymeraseと反応用バッファー、dNTP Mixtureを、あらかじめ2倍濃度で混合したプレミックスPCR酵素である。反応液調製の手間が大幅に減少し、また、コンタミネーションの危険性も軽減するので、ハイスループットな実験系にも有用である。
本製品に使用しているPrimeSTAR HS DNA Polymeraseは非常に強力な3’-5’exonuclease活性を有し、DNA合成において抜群の校正力を示す一方、Taq DNA Polymeraseに優る高い増幅効率も示す。常温下でのDNA Polymerase活性および3’-5’exonuclease活性を抑えるモノクロ－ナル抗体を添加しているため、PCR反応前のミスプライミングやプライマーの消化を防ぐことができる。また本酵素は高いプライミング効率を有しているため、アニーリング時間を短時間に設定でき、従来の反応時間短縮することができる。さらに、反応バッファーを高度に至適化することで、幅広いターゲットに対して高Fidelity、高感度、高特異性、高い成功率が実現した。
* PrimeSTAR HS DNA Polymeraseの特長は、こちらでご覧ください。

（100回、50 μl反応系）

PrimeSTAR HS (Premix)

500 μl×5

組成：

PrimeSTAR HS DNA Polymerase	1.25 U／25 μl
dNTP Mixture	2×conc.；各0.4 mM
PrimeSTAR Buffer	2×conc.；Mg2+＝2 mM

－20℃保存（4℃で3ヵ月保存可能）

注）過度な凍結融解の繰り返しは活性が低下する場合があります。使用頻度が高い場合、いったん融解したものは4℃保存をお勧めします。使用前には、転倒混和後スピンダウンしてください

（A）3 step PCRの場合

98℃	10 sec. ┓	30 cycles
55℃	5 sec. または15 sec. ┃
72℃	1 min.／kb ┛

（B）2 step PCRの場合

98℃	10 sec. ┓	30 cycles
68℃	1 min.／kb ┛

本酵素の場合、通常は3 step PCRでの反応をお勧めします。

●変性条件98℃

5～10 sec.を推奨します。94℃で行う場合は10～15 sec.に設定してください。

●アニーリング温度

まず55℃で試してください。

●アニーリング時間

Tm値（下記の式で計算）が55℃以上の場合→ 5 sec.に設定

Tm値（下記の式で計算）が55℃未満の場合→ 15 sec.に設定

　※ Tm値計算方法

Tm値（℃）＝ [（A、Tの数）×2]＋[（G、Cの数）×4]－5

プライマーの長さが25 mer以下の場合に適用してください。25 merを越える場合は、アニーリング時間を5 sec.に設定してください。

＜重要＞

本酵素はプライミング効率が非常に高い酵素ですので、アニーリング時間は5 sec.
もしくは15 sec.に設定して反応を行ってください。アニーリング時間が長くなると、スメアが生じる場合があります。
3 stepでスメアになる場合、もしくはTm値が70℃以上のプライマーを使用する場合には2 stepでの反応をお試しください。

PrimeSTAR HS (Premix)を用いて増幅したPCR産物のほとんどは平滑末端である。したがって、そのPCR産物をそのまま（必要に応じてリン酸化して）平滑末端のベクターにクローニングすることが可能である。平滑末端ベクターへのクローニングにはMighty Cloning Reagent Set (Blunt End) （製品コード 6027）が利用できる。
T-vectorにクローニングする場合は、PCR産物の3’末端にdAを付加する必要がある。T-vectorへのクローニングにはMighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR（製品コード 6019）が利用できる。

【ダイレクトシーケンスを行う場合】

本酵素は3’→5’exonuclease活性を有するため、ダイレクトシーケンシングを行う前にフェノール／クロロホルム処理などのタンパク質除去操作を行ってください。

「タカラバイオ PCR Enzymes Guide」では、PCR酵素・関連製品とそのアプリケーションをご紹介しています。
下記よりPDFでご覧いただけます。


PCR Enzymes Guide（PDF）

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