TALON^® (Cobalt) レジン－磁気ビーズ

TALON Magnetic Beadsは、ポリヒスチジンタグ（Hisタグ）融合タンパク質に対する高い親和性と特異性をもつTALON樹脂の利点と磁気ビーズによる簡便な分離法を組み合わせた製品である。磁気ビーズは予めコバルトで荷電されており、Hisタグ融合タンパク質に対してニッケルベースの樹脂より高い特異性を有している。コバルトはTALON独自の四座配位の金属キレーターによりビーズと結合しており、精製中にコバルトが漏出することはない。磁気セパレーターにセットするだけで、マイクロスケールのタンパク質を迅速かつ簡便に分離できる。

高度に特異的な結合と溶出

図1および表1に示した通り、TALON Magnetic Beadsは低分子から高分子までのHisタグ融合タンパク質と高い特異性で結合する。精製タンパク質は小容量（50～200 μl）で溶出され、濃縮試料が得られる（最高 3 mg/mlまで）。TALON Magnetic Beadsは5％懸濁液として提供されており、懸濁液1 ml当たりタンパク質750 μgの結合能が実証されている。


図1. TALON Magnetic Beadsを用いたHisタグ融合タンパク質の精製
Hisタグ融合タンパク質を大腸菌BL21株に発現させ、TALON Extractor Buffer（製品コード 635623）中で抽出した。続いて、200 μlのTALON Magnetic Beads懸濁液を水で洗浄して保存バッファーを除去し、ローディングバッファー（50 mMリン酸ナトリウム、0.3 M NaCl、pH7.2）で平衡化した。抽出液とTALON Magnetic Beadsを室温で30分間（6xHN-AcGFP）、または4℃で60分間（6xHN-LacZ）混和した。ビーズをローディングバッファーで洗浄し、続いて10 mMイミダゾールを添加したローディングバッファーで洗浄した後、250 mMイミダゾールを添加したローディングバッファーを用いてタンパク質を溶出した。
パネルA：TALON Magnetic Beadsによる6xHN-AcGFP精製物のSDS-PAGE分析（4～20％勾配ゲル）。レーン1：E. coli抽出液　レーン2：非吸着画分　レーン3：溶出画分
パネルB：TALON Magnetic Beadsによる6xHN-LacZ精製物のSDS-PAGE分析（4～20％勾配ゲル）。レーン1：E. coli抽出液　レーン2：非吸着画分　レーン3：溶出画分　レーンM：分子量マーカー
SDS-PAGEの結果はどちらのHisタグ融合タンパク質も高度に精製されたことを示している。

表1. TALON Magnetic Beadsを用いたHisタグ融合タンパク質の精製結果
*1：Relative Fluorescence Units (RFU) for 6xHNAcGFP.
*2：200 μl of a 5% suspension of TALON Magnetic Beads was used for each purification.


図2．1.5 mlのマイクロ遠心チューブ用のMagnetic Stand（製品コード 631964）
磁気ビーズと共に、タンパク質精製、免疫沈降、および細胞回収実験に使用できる。

4℃