7血清型を遺伝子タイピング（O157、O26、O111、O121、O103、O145）
- 4種類のキットで主要な7血清型を遺伝子タイピング
- プレミックス試薬のため、初心者でも簡単
- FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能
【重要なお知らせ】
弊社リアルタイムPCR装置「Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ」において弊社遺伝子検査キットを使用する場合の解析条件を変更いたしました。
変更の詳細はこちら
取扱説明書およびその他製品に付随する文書は、順次更新予定です。
弊社リアルタイムPCR装置「Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ」において弊社遺伝子検査キットを使用する場合の解析条件を変更いたしました。
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製品説明
腸管出血性大腸菌の検出においては、まずベロ毒素遺伝子の保有状況によるスクリーニングを行い、ベロ毒素遺伝子陽性であれば、O抗原型の遺伝子タイピングをした上で、分離培養を行う方法が効率的であるとされている。
本シリーズは、腸管出血性大腸菌のO抗原型の遺伝子タイピングを、リアルタイムPCRにより行うためのキットで、O抗原型の主要な血清型の7種類、O157／O26、O111／O121、O103／O145をそれぞれ検出することができる。各キットには、O157とO26、O111とO121、O103とO145組合せで、それぞれのO抗原合成遺伝子領域の遺伝子を検出するためのFAM 標識プローブとROX標識プローブが含まれている。（下表）二波長を同時にモニタリングすることで、一本のチューブで2種類のO抗原型の検出が可能である。リアルタイムPCRによるタイピングであり、電気泳動が不要で、迅速に結果が得られる。
【ご注意】
本シリーズは、腸管出血性大腸菌のO抗原型の遺伝子タイピングを、リアルタイムPCRにより行うためのキットで、O抗原型の主要な血清型の7種類、O157／O26、O111／O121、O103／O145をそれぞれ検出することができる。各キットには、O157とO26、O111とO121、O103とO145組合せで、それぞれのO抗原合成遺伝子領域の遺伝子を検出するためのFAM 標識プローブとROX標識プローブが含まれている。（下表）二波長を同時にモニタリングすることで、一本のチューブで2種類のO抗原型の検出が可能である。リアルタイムPCRによるタイピングであり、電気泳動が不要で、迅速に結果が得られる。
【ご注意】
- 製品コードCY237、CY238、CY239では、Lot. AF4P0**およびAK501Zより、製品の容量および価格を変更しました（2015年5月25日）
- 製品コードCY237、CY238、CY239では、測定結果の判定方法に「＋／－判定の基準値」を追加しました。詳しくは取扱説明書のp11、15をご確認ください。（2015年3月24日）
・CycleavePCR EHEC (O157/O26) Typing Kit（製品コード CY237）
・CycleavePCR EHEC (O111/O121) Typing Kit（製品コード CY238）
・CycleavePCR EHEC (O103/O145) Typing Kit（製品コード CY239）
上記3製品を用いる検出法は、厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知（平成26年11月20日）
「腸管出血性大腸菌O26、O103、O111、O121、O145及びO157の検査法について」（食安監発1120第1号）に収載されました。
詳しくはこちらをご覧ください
・CycleavePCR EHEC (O111/O121) Typing Kit（製品コード CY238）
・CycleavePCR EHEC (O103/O145) Typing Kit（製品コード CY239）
上記3製品を用いる検出法は、厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知（平成26年11月20日）
「腸管出血性大腸菌O26、O103、O111、O121、O145及びO157の検査法について」（食安監発1120第1号）に収載されました。
| 製品 | ターゲット遺伝子 | 蛍光検出波長 |
| CycleavePCR EHEC (O157/O26) Typing Kit | O157 | FAM |
| O26 | ROX | |
| CycleavePCR EHEC (O111/O121) Typing Kit | O111 | FAM |
| O121 | ROX | |
| CycleavePCR EHEC (O103/O145) Typing Kit | O103 | FAM |
| O145 | ROX |
内容
例）CycleavePCR EHEC（O157/O26）Typing Kit（製品コード CY237）
＊ 蛍光標識プローブを含んでいますので、遮光に留意してください。
コンポーネント1～3は、製品に添付している小箱を利用し、4～6のコンポーネントとは別に保管してください。
【コンポーネントの説明】
2×Cycleave Reaction Mixture：
PCR反応試薬。反応に必要な酵素、Buffer、dNTP Mixtureを含む。
O157/O26 Primer/Probe Mix：
O157およびO26のO抗原合成遺伝子領域の遺伝子をそれぞれ検出するためのプライマー・プローブ溶液。O157検出用のプローブはFAM、O26検出用のプローブはROXで標識されている。
dH2O：滅菌水
O157 Positive Control：O157検出用陽性コントロール
O26 Positive Control：O26検出用陽性コントロール
EASY Dilution (for Real Time PCR)：
Positive Controlを希釈する際に、希釈溶液として使用
| ●1． | 2×Cycleave Reaction Mixture | 2×conc. | 250 μl |
| ●2． | O157/O26 Primer/Probe Mix＊ | 5× conc. | 100 μl |
| ○3． | dH2O | 1 ml | |
| ●4． | O157 Positive Control | 40 μl（8回分） | |
| ●5． | O26 Positive Control | 40 μl（8回分） | |
| ○6． | EASY Dilution (for Real Time PCR) | 1 ml | |
コンポーネント1～3は、製品に添付している小箱を利用し、4～6のコンポーネントとは別に保管してください。
【コンポーネントの説明】
2×Cycleave Reaction Mixture：
PCR反応試薬。反応に必要な酵素、Buffer、dNTP Mixtureを含む。
O157/O26 Primer/Probe Mix：
O157およびO26のO抗原合成遺伝子領域の遺伝子をそれぞれ検出するためのプライマー・プローブ溶液。O157検出用のプローブはFAM、O26検出用のプローブはROXで標識されている。
dH2O：滅菌水
O157 Positive Control：O157検出用陽性コントロール
O26 Positive Control：O26検出用陽性コントロール
EASY Dilution (for Real Time PCR)：
Positive Controlを希釈する際に、希釈溶液として使用
保存
－20℃
CycleavePCR EHEC (O157/O26) Typing Kit（製品コード CY237）での検出例
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キット以外に必要な機器など（主なもの）
・Thermal Cycler Dice Real Time System III with PC（製品コード TP970）
・Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960：終売）
・Thermal Cycler Dice Real Time System Lite（製品コード TP700/TP760）
・Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）など
（詳しくは弊社までお問い合わせください。)
200 μl、20 μl、10 μl 各マイクロピペット
マイクロピペット用チップ（疎水性フィルター付）
卓上遠心機
補足資料
Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ「食品環境検査用ソフトウェア」を使用の場合に便利な“Quick Manual～定性解析（＋／－判定）用～”を用意している。
キットの説明書とあわせて使用する。
Quick Manual ～定性解析（＋／－判定）用～（PDF、946 K）
また、「CycleavePCR EHEC（O抗原型）Typing Kit」を用いて、6種のO抗原型を同時に測定する場合に便利なマニュアルと、結果出力と解析方法を示したマニュアルを用意しています。解析の一例としてご参考ください。
6種のO抗原型を同時に測定する場合の設定方法（PDF、337 K）
O抗原型タイピングキットの結果出力と解析方法（PDF、337 K）
キットの説明書とあわせて使用する。
Quick Manual ～定性解析（＋／－判定）用～（PDF、946 K）
また、「CycleavePCR EHEC（O抗原型）Typing Kit」を用いて、6種のO抗原型を同時に測定する場合に便利なマニュアルと、結果出力と解析方法を示したマニュアルを用意しています。解析の一例としてご参考ください。
6種のO抗原型を同時に測定する場合の設定方法（PDF、337 K）
O抗原型タイピングキットの結果出力と解析方法（PDF、337 K）
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- 注意事項
- 本製品は食品分析および環境分析用試薬です。ヒト、動物への医療、臨床診断には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。検査結果判定により発生する問題に関してタカラバイオ株式会社は一切の責任を負いません。
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