- 組換えCas9タンパク質に対するウサギポリクローナル抗体／マウスモノクローナル抗体
- ポリクローナル抗体はwild-type Cas9だけでなくバリアントも認識
- 高い特異性：哺乳類細胞ライセートに対してバックグラウンドが出ない
- 高感度：ウェスタンブロッティングにより、わずか 0.5～1 ngの組換えCas9を検出でき、Cas9発現細胞3,500個からのシグナル検出も可能
製品説明
Streptococcus pyogenes由来の組換えCas9タンパク質に対する抗体として、ウサギポリクローナル抗体（製品コード 632606、632607）およびマウスモノクローナル抗体（製品コード 632628、632627）の2種類の製品を用意している。特異性、感度共に高く、哺乳類細胞のウェスタンブロッティングにおいて低バックグラウンドで、ポリクローナル抗体は0.5 ng、モノクローナル抗体は1 ngの組換えCas9を検出できる。
ポリクローナル抗体はCas9ヌクレアーゼの3種類のバリアント（wild-type Cas9、Cas9 nickase、Cas9 nuclease-deficient mutant）も認識する。
図1．ウェスタンブロッティングにおけるGuide-it Cas9 Polyclonal Antibodyの検出感度
0.15～20.0 ngの組換えCas9(rCas9)タンパク質を電気泳動後、ブロッティングし、Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody（1:1,000 希釈）の検出感度を調べた。二次抗体はHRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody（1:5,000 希釈）を用い、ECL試薬で検出した。ネガティブコントロールには、HT1080、HEK293細胞の細胞ライセートを用いた。
図2．ウェスタンブロッティングにおけるGuide-it Cas9 Polyclonal Antibodyの特異性
遺伝子導入をしていない複数の哺乳類細胞とCas9タンパク質を安定発現するHEK293細胞（CMV promoter）の細胞ライセートを用いてGuide-it Cas9 Polyclonal Antibodyの特異性を調べた。Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody (1:1,000 希釈)を反応させた後、二次抗体としてHRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody(1:1,000 希釈)を用い、ECL試薬で検出した。ポジティブコントロールには1 ngの組換えCas9タンパク質を用いた。
図3．ウェスタンブロッティングにおけるGuide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1)の検出感度
ポリクローナル抗体はCas9ヌクレアーゼの3種類のバリアント（wild-type Cas9、Cas9 nickase、Cas9 nuclease-deficient mutant）も認識する。
図1．ウェスタンブロッティングにおけるGuide-it Cas9 Polyclonal Antibodyの検出感度
0.15～20.0 ngの組換えCas9(rCas9)タンパク質を電気泳動後、ブロッティングし、Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody（1:1,000 希釈）の検出感度を調べた。二次抗体はHRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody（1:5,000 希釈）を用い、ECL試薬で検出した。ネガティブコントロールには、HT1080、HEK293細胞の細胞ライセートを用いた。
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Lane 1：HT1080細胞ライセート（3.5×104 cells） Lane 2：HEK293細胞ライセート（3.5×104 cells） Lane 3：rCas9 protein 0.15 ng Lane 4：rCas9 protein 0.30 ng Lane 5：rCas9 protein 0.625 ng |
Lane 6：rCas9 protein 1.25 ng Lane 7：rCas9 protein 2.5 ng Lane 8：rCas9 protein 5.0 ng Lane 9：rCas9 protein 10.0 ng Lane 10：rCas9 protein 20.0 ng |
図2．ウェスタンブロッティングにおけるGuide-it Cas9 Polyclonal Antibodyの特異性
遺伝子導入をしていない複数の哺乳類細胞とCas9タンパク質を安定発現するHEK293細胞（CMV promoter）の細胞ライセートを用いてGuide-it Cas9 Polyclonal Antibodyの特異性を調べた。Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody (1:1,000 希釈)を反応させた後、二次抗体としてHRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody(1:1,000 希釈)を用い、ECL試薬で検出した。ポジティブコントロールには1 ngの組換えCas9タンパク質を用いた。
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Lane 1：HepG2細胞ライセート（3.5×104 cells） Lane 2：CHO-K1細胞ライセート（3.5×104 cells） Lane 3：HeLa細胞ライセート（3.5×104 cells） Lane 4：MCF7細胞ライセート（3.5×104 cells） Lane 5：HEK293細胞ライセート（3.5×104 cells） Lane 6：HT1080細胞ライセート（3.5×104 cells） Lane 7：NIH3T3細胞ライセート（3.5×104 cells） |
Lane 8：Lysis buffer Lane 9：rCas9 protein 1 ng Lane 10：Cas9発現HEK293細胞ライセート（2.0×103 cells） Lane 11：Cas9発現HEK293細胞ライセート（5.0×103 cells） Lane 12：Cas9発現HEK293細胞ライセート（1.0×104 cells） Lane 13：Cas9発現HEK293細胞ライセート（1.5×104 cells） |
図3．ウェスタンブロッティングにおけるGuide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1)の検出感度
- 1～5 ngの組換えCas9 (rCas9）を用いて、Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1）（1：3,000希釈）で検出を行った。ネガティブコントロールには、HEK293細胞の細胞ライセートを用いた。
- Cas9タンパク質を発現したHEK293細胞の細胞ライセートを用いて、Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1）（1：3,000希釈）で検出を行った。ネガティブコントロールには、HEK293、NIH373細胞の細胞ライセートを用いた。
保存
－20℃
用途
ウェスタンブロッティング（1：1,000～1：5,000希釈）
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