様々な試料からの核酸精製が不要
- 核酸精製は不要！
血液（全血）、血清、臓器乳剤、耳介片乳剤、臓器片、耳介片からの検出に対応 - 特定家畜伝染病防疫指針（令和6年3月28日改正）＊の診断マニュアルに記載されたリアルタイムPCR法として使用可能
※「豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針令和2年7月1日農林水産大臣公表 （一部変更：令和6年3月28日）」および「アフリカ豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針 令和2年7月1日農林水産大臣公表 （一部変更：令和6年3月28日）」 - CSFV・ASFV遺伝子、インターナルコントロールを1反応で同時検出！
- PCR増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性を防止
※本製品は、従来製品（製品コード 9811、RC211A、RC212A、RC215）のバージョンアップ品です。従来製品は在庫がなくなり次第、販売を終了します。
豚熱ウイルス遺伝子型1識別用試薬はこちら
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製品説明
豚熱（Classical swine fever, CSF）およびアフリカ豚熱（African swine fever, ASF）は、それぞれCSFウイルス（以下CSFV）およびASFウイルス（以下ASFV）が豚やイノシシに感染することで引き起こされる疾病です。
本製品は、リアルタイムRT-PCR法によりCSFV遺伝子・ASFV遺伝子およびインターナルコントロールとしてサンプル由来のswine GAPDH遺伝子を同時に検出するためのプライマー、プローブ、RT-PCR酵素からなる試薬（研究用試薬）です。
なお、「豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針令和2年7月1日農林水産大臣公表（一部変更：令和6年3月28日）」の「【参考】（別紙1）豚熱の診断マニュアル」、および「アフリカ豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針令和2年7月1日農林水産大臣公表（一部変更：令和6年3月28日）」の「【参考】（別紙1）アフリカ豚熱の診断マニュアル」では、リアルタイムPCRの実施に市販キットが利用できるとされており、本製品に関してもリアルタイムPCR検査への適用が可能です。
※本製品には、農林水産省委託研究事業「安全な農畜水産物安定供給のための包括的レギュラトリーサイエンス研究推進委託事業」のうち課題解決型プロジェクト研究「官民・国際連携によるASFワクチン開発の加速化」および「野生イノシシにおけるアフリカ豚熱防疫措置の具体化に関する緊急実証研究」における国立研究開発法人農研機構との共同研究の成果が活用されています。
【検出対象遺伝子】
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe Ver.2（製品コード RC213A）
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe (with ROX Reference Dye) ver.2（製品コード RC214A）
※本製品は、Applied BiosystemsのリアルタイムPCR装置など、ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置での解析に必要なROX Reference Dyeを添付しています。
【試料の種類と核酸の粗抽出法のまとめ】
＊1 補足資料「Lysis Buffer S Ver.2を用いた溶血試料の前処理方法について」をご参照ください。
＊2 試料の乳剤化は必要ありません。
本製品は、リアルタイムRT-PCR法によりCSFV遺伝子・ASFV遺伝子およびインターナルコントロールとしてサンプル由来のswine GAPDH遺伝子を同時に検出するためのプライマー、プローブ、RT-PCR酵素からなる試薬（研究用試薬）です。
なお、「豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針令和2年7月1日農林水産大臣公表（一部変更：令和6年3月28日）」の「【参考】（別紙1）豚熱の診断マニュアル」、および「アフリカ豚熱に関する特定家畜伝染病防疫指針令和2年7月1日農林水産大臣公表（一部変更：令和6年3月28日）」の「【参考】（別紙1）アフリカ豚熱の診断マニュアル」では、リアルタイムPCRの実施に市販キットが利用できるとされており、本製品に関してもリアルタイムPCR検査への適用が可能です。
※本製品には、農林水産省委託研究事業「安全な農畜水産物安定供給のための包括的レギュラトリーサイエンス研究推進委託事業」のうち課題解決型プロジェクト研究「官民・国際連携によるASFワクチン開発の加速化」および「野生イノシシにおけるアフリカ豚熱防疫措置の具体化に関する緊急実証研究」における国立研究開発法人農研機構との共同研究の成果が活用されています。
【検出対象遺伝子】
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe Ver.2（製品コード RC213A）
| 検出対象遺伝子 | プローブ標識 |
| CSFV遺伝子 | Cyanine5 （レポーター）／ダーククエンチャー |
| ASFV遺伝子 | ROX（レポーター）／ダーククエンチャー |
| インターナルコントロール（IC） | FAM（レポーター）／ダーククエンチャー |
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe (with ROX Reference Dye) ver.2（製品コード RC214A）
| 検出対象遺伝子 | プローブ標識 |
| CSFV遺伝子 | Cyanine5 （レポーター）／ダーククエンチャー |
| ASFV遺伝子 | FAM（レポーター）／ダーククエンチャー |
| インターナルコントロール（IC） | HEX（レポーター）／ダーククエンチャー |
【試料の種類と核酸の粗抽出法のまとめ】
| 試料の種類 | 試料の状態 | Solution N | Lysis Buffer S Ver.2 | Tissue Direct Solution E |
| 全血 | ー | ○ | × | × |
| 血清および臓器乳剤 | 着色（薄い） | ○ | ○ | × |
| 着色（中程度） | ○ | △＊1 | × | |
| 着色（濃い）・濁りあり | ○ | × | × | |
| 耳介片乳剤 | ー | ○ | ○ | × |
| 臓器片＊2 | ー | × | × | ○ |
| 耳介片＊2 | ー | × | × | ○ |
＊2 試料の乳剤化は必要ありません。
内容
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix & Primer/Probe Ver.2（製品コード RC213A）
| RT-qPCR Mix＊1 | 2× | 625 μl | ×2 |
| Primer/Probe Mix (CSF/ASF) 4＊2 | 10× | 250 μl | |
| Primer/Probe Mix (GAPDH) 4＊2 | 10× | 250 μl | |
 RNase Free H2O | 1 ml | ||
CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix & Primer/Probe (with ROX Reference Dye) Ver.2（製品コード RC214A）
| RT-qPCR Mix＊1 | 2× | 625 μl | ×2 |
| Primer/Probe Mix (CSF/ASF) 3＊2 | 10× | 250 μl | |
| Primer/Probe Mix (GAPDH) 3＊2 | 10× | 250 μl | |
| ROX Reference Dye II＊2 | 50× | 50 μl | |
| RNase Free H2O | 1 ml | ||
| EASY Dilution (for Real Time PCR) | 1 ml | ×4 | |
| Positive Control DNA (CSF/ASF) 2 | 1×106 copies/μl | 25 μl | |
| Positive Control DNA (GAPDH) | 1×106 copies/μl | 25 μl | |
 Solution N | 300 μl | |
| Saline（生理食塩水） | 1 ml | ×3 |
| Lysis Buffer S 2 | 2× | 500 μl |
| TD Solution E1 | 2 ml | ||
| TD Solution E2 | 18 ml | ||
＊1 反応に必要な酵素、基質等を含みます。
＊2 遮光に留意してください。
＊3 特許出願中です（2024年8月末時点）。
保存
－20℃
キット以外に必要な器具、機器（主なもの）
- 【 器具 】
-
- マイクロピペット
- マイクロピペット用チップ（疎水性フィルター付のもの）
- リアルタイムPCR用のチューブ 等
- 【 機器 】リアルタイムPCR装置
-
- CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe Ver.2（製品コード RC213A）の場合
Thermal Cycler Dice Real Time System IV（製品コード TP1000/TP1010/TP1030）
Thermal Cycler Dice Real Time System III (Cy5) with PC（製品コード TP990）
Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900/TP960：終売＊）
CronoSTAR 96 Real-Time PCR System（製品コード 640231/640232）
CFX96 Real-Time PCR Detection System（Bio-Rad社）
LightCycler 96 System（Roche Diagnostics社）
*TP900/TP960 は、Cy5 オプションフィルター搭載機のみです。 - CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe (with ROX Reference Dye) Ver.2（製品コード RC214A）の場合
QuantStudio 5 Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific社）
LightCycler 480 System II（Roche Diagnostics社）
- CSFV/ASFV Direct RT-qPCR Mix ＆ Primer/Probe Ver.2（製品コード RC213A）の場合
補足資料
【Lysis Buffer S Ver.2を用いた溶血試料の前処理方法について】
【核酸精製について】
血清および臓器乳剤において着色や濁りが認められる試料は、以下の補足資料を参照ください。
Lysis Buffer S Ver.2を用いた溶血試料の前処理方法ついて
Lysis Buffer S Ver.2を用いた溶血試料の前処理方法ついて
【核酸精製について】
PCR 阻害が生じた場合や、より高感度に検出する必要がある場合には、精製核酸を用いることも可能です。
核酸の精製には以下の製品がご利用いただけます。
核酸の精製には以下の製品がご利用いただけます。
- 血清からの核酸精製
NucleoSpin Virus （製品コード 740983.10/.50/.250） - 臓器乳剤からの核酸精製
NucleoSpin RNA（製品コード 740955.10/.50/.250）
操作方法の詳細は、以下をご確認ください。
血清・臓器乳剤からの核酸精製プロトコール
Protocols
- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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