2×Premix PCR Solution

PCR用プレミックス試薬シリーズ(Hot Start Version)

メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR R028A R028A Premix Taq™ Hot Start Version (500 μl×5本)
  • バルクなど特別対応可能
100回(50 μl反応系) ¥19,500
説明書・データシート・ベクター情報
TKR RR030A RR030A Premix Ex Taq™ Hot Start Version (500 μl×5本)
  • バルクなど特別対応可能
100回(50 μl反応系) ¥21,500
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

本製品は、ホットスタートPCR用のDNAポリメラーゼ、反応バッファー、dNTP Mixtureをあらかじめ2倍濃度で混合したものである。TaKaRa Taq HS、TaKaRa Ex Taq HSは、抗Taq抗体とTaKaRa TaqあるいはTaKaRa Ex Taqを混合したホットスタートPCR用の酵素で、高温に加熱するまでは抗Taq抗体が酵素に結合しポリメラーゼ活性を抑えているため、サイクル前のミスプライミングやプライマーダイマ-に由来する非特異的増幅を防ぐことができる。抗Taq抗体は、PCRの最初のDNA変性ステップで変性するため、従来のPCR条件で反応できる。抗Taq抗体を失活させるための特別なステップは必要ない。

保存

-20℃
凍結融解の繰り返しにより活性が低下する恐れがあるため、融解後はPCR用のチューブに小分けして-20℃で保存する。(50 μl反応の場合、25 μlずつ)

組成

Premix Taq Hot Start Version (製品コード R028A)
TaKaRa Taq HS 1.25 U/25 μl
dNTP Mixture 2×conc. ;各0.4 mM
PCR Buffer 2×conc. ;20 mM Tris-HCl (pH8.3), 100 mM KCl, 3 mM MgCl2


Premix Ex Taq Hot Start Version (製品コード RR030A)
TaKaRa Ex Taq HS 1.25 U/25 μl
dNTP Mixture 2×conc. ;各0.4 mM
Ex Taq Buffer 2×conc. ;4 mM Mg2+を含む

用途

Hot Start PCR法によるDNA増幅

PCR産物について

Premix Taq Hot Start Version、Premix Ex Taq Hot Start Versionを用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にAが1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-vector[pMD20(製品コード 3270)、pMD19(simple)(製品コード3271)など]にクローニングすることができる。また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。

PCR検定

  1. λ DNAを鋳型としたPCR反応において良好な増幅が見られることを確認している。
    増幅サイズ:Premix Ex Taq Hot Start Version:20 kb
     Premix Taq Hot Start Version:8 kb
  2. ヒトゲノムDNAを鋳型としたsingle copy geneのPCR反応において良好な増幅が見られることを確認している。
    増幅サイズ:Premix Ex Taq Hot Start Version:17.5 kb
     Premix Taq Hot Start Version:3 kb

PCR反応例 (total 50μl PCR)

Premix Ex Taq Hot Start Version or Premix Taq Hot Start Version* 25 μl
Template <500 ng
Primer 1 0.2~1.0 μM(final conc.)
Primer 2 0.2~1.0 μM(final conc.)
滅菌蒸留水 up to 50 μl
* 均一になるまでゆるやかに転倒混合して使用する。

PCR条件

PCRの最初のDNA変性ステップで抗Taq抗体は失活するので、従来のPCR条件が使用できる。抗Taq抗体を失活させるための特別なステップは必要ない。

(例) 1 kb DNAを増幅する時
98℃
55℃
72℃
10 sec.
30 sec.
1 min.
 
30 cycles or 98℃
68℃
10 sec.
1 min.
 
30 cycles

注) 変性条件は、サーマルサイクラーの使用機種と反応チューブの種類に合わせて設定する。設定の目安は、94℃ 20~30 sec.、あるいは98℃ 5~10 sec.

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