Cloned

T4 DNA Ligase

  • ●反応用バッファー添付
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR 2011A 2011A T4 DNA Ligase
  • バルクなど特別対応可能
25,000 U ¥11,000
説明書・データシート・ベクター情報
TKR 2011B(A×5) 2011B(A×5) T4 DNA Ligase
  • バルクなど特別対応可能
125,000 U ¥44,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

本酵素は、隣接したDNA鎖の5’-P末端と3’-OH末端をホスホジエステル結合で連結する酵素である。補酵素としてATPを要求し、反応の中間体としてEnzyme-ATP complexが作られ、これがDNAに作用する。本酵素は突出末端どうしでも、平滑末端どうしでも連結できる。また、DNAとRNA、RNAどうしもわずかに連結できる。

保存

-20℃

濃度

350 U/μl

形状

10 mMTris-HCl(pH7.5)
50 mMKCl
1 mMDTT
0.1 mMEDTA
50%グリセロール

添付Buffer組成(10×)

660 mMTris-HCl(pH7.6)
66 mMMgCl2
100 mMDTT
1 mMATP

活性の定義

6 μg/20 μlのλDNA-Hind III分解物を、16℃で約30分間に90%以上ライゲーションさせる酵素活性を1 Uとする。
本酵素の1 Uは、ATP-PPi交換反応における0.008 Weiss Unitに相当する。

Weiss Unit反応液組成:
66 mM Tris-HCl(pH7.6)
6.6 mM MgCl2
10 mM DTT
66 μM ATP
3.3 μM [32P] Na4P2O7

活性測定用反応液組成

66 mM Tris-HCl緩衝液(pH7.6)
6.6 mM MgCl2
10 mM DTT
0.1 mM ATP
6 μg/20 μlλDNA-Hind III分解物

純度

2,000 Uの本酵素と1 μgのλDNA-Hind III分解物を37℃、16時間反応させても、DNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
2,000 Uの本酵素と1 μgのclosed circular (RF I) pBR 322 DNAを37℃、16時間反応させても、DNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
2,000 Uの本酵素と1 μgの16S, 23S rRNAを37℃、16時間反応させても、RNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

使用上の注意

ライゲーション反応は、末端塩基配列の違いにより、反応速度が異なる。一般に次のような傾向がある。
突出末端 Hind III>Pst I>EcoR I>BamH I>Sal I
Hind III siteはSal I siteより10~40倍速くライゲーションされる)
平滑末端 Hae III>Alu I>Hinc II>Sma I
Hae III siteはSma I siteより5~10倍速くライゲーションされる)
  EcoR V>Sca I>Pvu II>Nru I

用途

  • インサートDNAとベクターDNAとの連結
  • DNA断片とリンカーあるいはアダプターDNAとの連結

起源

Escherichia coli carrying the plasmid that enable highly expression of T4 DNA ligase gene

一般的性質

  • 分子量
    約62,000
  • サブユニット
    シングルポリペプチド
  • 至適pH
    pH7.6(pH7.2~7.8、Tris-HCl)
    (pH6.9で46%、pH8.0で65%に活性低下)
  • 補因子
    ATP
  • 活性化剤
    二価カチオン Mg2+(至適濃度:10 mM)
    還 元 剤 DTT、2-メルカプトエタノール
    (2-メルカプトエタノールの方が効果大)
  • 阻害剤
    dATP(拮抗阻害剤)
    高濃度一価カチオン 200 mM Na+、200 mM K+
    (ただし、この濃度において10%ポリエチレングリコール(PEG)#6000存在下では逆に活性化作用を示す)
    多 糖 類 ヘパリン、カラギナン

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