製品説明
本酵素は、鋳型、プライマー（DNAおよびRNAともに可）存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5’→3’方向に合成する。また、二本鎖特異的5’→3’ exonuclease活性および一本鎖特異的3’→5’ exonuclease活性も有している。
保存
－20℃
濃度
3～6 U/μl
形状
| 50 mM | リン酸カリウム緩衝液（pH6.5） |
| 1 mM | DTT |
| 50％ | グリセロール |
添付Buffer組成（10×）
| 500 mM | Tris-HCl（pH7.8） |
| 100 mM | MgCl2 |
| 1 mM | DTT |
活性の定義
ポリd（A-T）合成DNAを鋳型/プライマーとして用い、37℃、pH7.4において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 67 mM | リン酸カリウム緩衝液（pH7.4) |
| 6.7 mM | MgCl2 |
| 0.1 mM | DTT |
| 20 μM | ポリd (A-T) |
| 33 μM | dATP |
| 33 μM | [3H]dTTP |
純度
SDS電気泳動で90％以上の純度を示す。
10 Uの本酵素と、1 μgのclosed circular（RF I）pBR322 DNAとを37℃、1時間反応させても、DNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
使用上の注意
- 本酵素は、希釈による活性低下は起こらないが、強く撹拌すると失活することがある。
- endonucleaseを含まないため、単独ではほとんどニックトランスレーション活性を示さない。
- DNAと強い親和性があるため、過剰に用いるとaggregationが起こり、反応が充分進まないことがある。
用途
- DNase I（製品コード 2270）との併用によるニックトランスレーション2)
- Okayama-Berg法3)におけるsecond strand DNA鎖の合成反応(DNA Polymerase I 0.3 μgは約2.5 Uに相当する）
起源
Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Pol I
触媒する反応
- 5'→3' DNA polymerase活性
鋳型、プライマー（DNA、RNA共に可）存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5'→3'方向に合成する。
polymerase活性による反応には以下の3種類がある
● gap filling：二本鎖DNAのギャップ部分の3'-OH基にヌクレオチドを付加し、その一本鎖部分を埋める。
● nick translation：二本鎖DNAのニック部分の3'-OH末端にヌクレオチドを付加し、同時に5'末端のヌクレオチドをexonucleolyticに除去する。
● strand displacement：ニック部分の3'-OH末端にヌクレオチドを付加することにより、5'末端を持つ鎖を置換する。
- 二本鎖特異的5'→3'exonuclease活性
損傷を受けたヌクレオチドを除去する。
DNA/RNAハイブリッド中のRNAも分解する。
- 一本鎖特異的3'→5'exonuclease活性
複製のfidelityに関与している。2. とは異なるドメインに存在する。
一般的性質
- 分子量
109,000
- サブユニット
1分子中にZn2＋Mを1分子含む一本鎖単純ポリペプチド
- 至適pH
pH7.4
- 補因子
Mg2＋
- 安定性
激しい撹拌により失活する。
- 至適塩濃度
100 mM KCl
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