Cloned

DNA Polymerase I (E. coli )

  • ●反応用バッファー添付

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メーカー
略称		 製品コード TaKaRa
Code		 製品名 容量 価格（税別）
キャンペーン価格		 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報		 参考
資料
TKR 2130A 2130A DNA Polymerase I（E. coli）
  • 修飾酵素
  • カスタム製造について
 500 U ￥11,500
￥9,200
 2020/05/25～
2020/08/31
 説明書・データシート・ベクター情報
TKR 2130B(A×5) 2130B(A×5) DNA Polymerase I（E. coli）
  • 修飾酵素
  • カスタム製造について
 2,500 U ￥46,000
￥36,800
 2020/05/25～
2020/08/31
 説明書・データシート・ベクター情報

※色文字での表示は、キャンペーン価格およびそのキャンペーン期間です。

製品説明

本酵素は、鋳型、プライマー（DNAおよびRNAともに可）存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5’→3’方向に合成する。また、二本鎖特異的5’→3’ exonuclease活性および一本鎖特異的3’→5’ exonuclease活性も有している。

保存

－20℃

濃度

3～6 U/μl

形状

50 mMリン酸カリウム緩衝液（pH6.5）
1 mMDTT
50％グリセロール

添付Buffer組成（10×）

500 mMTris-HCl（pH7.8）
100 mMMgCl2
1 mMDTT

活性の定義

ポリd（A-T）合成DNAを鋳型/プライマーとして用い、37℃、pH7.4において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

67 mMリン酸カリウム緩衝液（pH7.4)
6.7 mMMgCl2
0.1 mMDTT
20 μMポリd (A-T)
33 μMdATP
33 μM[3H]dTTP

純度

SDS電気泳動で90％以上の純度を示す。
10 Uの本酵素と、1 μgのclosed circular（RF I）pBR322 DNAとを37℃、1時間反応させても、DNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

使用上の注意

  • 本酵素は、希釈による活性低下は起こらないが、強く撹拌すると失活することがある。
  • endonucleaseを含まないため、単独ではほとんどニックトランスレーション活性を示さない。
  • DNAと強い親和性があるため、過剰に用いるとaggregationが起こり、反応が充分進まないことがある。

用途

  • DNase I（製品コード 2270）との併用によるニックトランスレーション2)
  • Okayama-Berg法3)におけるsecond strand DNA鎖の合成反応(DNA Polymerase I 0.3 μgは約2.5 Uに相当する）

起源

Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Pol I

触媒する反応

  1. 5'→3' DNA polymerase活性
    鋳型、プライマー（DNA、RNA共に可）存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5'→3'方向に合成する。
    DNA polymerase活性
    polymerase活性による反応には以下の3種類がある
    ● gap filling：二本鎖DNAのギャップ部分の3'-OH基にヌクレオチドを付加し、その一本鎖部分を埋める。 ● nick translation：二本鎖DNAのニック部分の3'-OH末端にヌクレオチドを付加し、同時に5'末端のヌクレオチドをexonucleolyticに除去する。 ● strand displacement：ニック部分の3'-OH末端にヌクレオチドを付加することにより、5'末端を持つ鎖を置換する。

  2. 二本鎖特異的5'→3'exonuclease活性
    3'exonuclease活性

    損傷を受けたヌクレオチドを除去する。
    DNA/RNAハイブリッド中のRNAも分解する。

  3. 一本鎖特異的3'→5'exonuclease活性
    5'exonuclease活性

    複製のfidelityに関与している。2. とは異なるドメインに存在する。

一般的性質

  • 分子量
    109,000
  • サブユニット
    1分子中にZn2＋Mを1分子含む一本鎖単純ポリペプチド
  • 至適pH
    pH7.4
  • 補因子
    Mg2＋
  • 安定性
    激しい撹拌により失活する。
  • 至適塩濃度
    100 mM KCl

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