Cloned

Klenow Fragment (Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)

  • ●反応用バッファー添付
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR 2140A 2140A Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)
  • 修飾酵素、逆転写酵素 サマーキャンペーン
  • バルクなど特別対応可能
200 U ¥13,500
¥10,125
2017/07/03~
2017/08/31

説明書・データシート・ベクター情報
TKR 2140B(A×5) 2140B(A×5) Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)
  • 修飾酵素、逆転写酵素 サマーキャンペーン
  • バルクなど特別対応可能
1,000 U ¥52,000
¥39,000
2017/07/03~
2017/08/31

説明書・データシート・ベクター情報
TKR 2140AK 2140AK Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)(2 U/μl)
  • 労働安全衛生法
  • 安全データシート(SDS)添付
200 U ¥13,500
説明書・データシート・ベクター情報
TKR 2140BK(AK×5) 2140BK(AK×5) Klenow Fragment(Large Fragment E. coli DNA Polymerase I)(2 U/μl)
  • 労働安全衛生法
  • 安全データシート(SDS)添付
1,000 U ¥52,000
説明書・データシート・ベクター情報

※色文字での表示は、キャンペーン価格およびそのキャンペーン期間です。

製品説明

本酵素は、鋳型、プライマー(DNAおよびRNAともに可)存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5’→3’方向に合成する。本酵素は、E. coli DNA polymeraseIの構造遺伝子pol Aの開始コドンから下流約1,000 bpまでを欠失させたものをクローニングした大腸菌より精製している。そのため、3’→5’ exonuclease活性は含まれるが、5’→3’ exonuclease活性は全く含まれない。
また製品コード 2140AK/BKの製品は、Kilo-Sequencing用Deletion Kit (製品コード 6030)用に濃度調製したもので、形状組成の一部をグリセロールからエチレングリコールに変えています。

保存

-20℃

濃度

5 U/μl(製品コード 2140A、2140B)
2 U/μl(製品コード 2140AK、2140BK)

形状

(製品コード 2140A、2140B)
リン酸カリウム緩衝液(pH6.5)50 mM
DTT1 mM
グリセロール50%

(製品コード 2140AK、2140BK)
リン酸カリウム緩衝液(pH6.5)50 mM
DTT1 mM
エチレングリコール50%

添付Buffer組成(10×)

(製品コード 2140A、2140B)
100 mMTris-HCl(pH 7.5)
70 mM MgCl2
1 mMDTT

注意

製品コード 2140AK、2140BKには反応用バッファーは添付されていない。

活性の定義

Poly d(A-T)合成DNAを鋳型/プライマーとして用い、37℃、pH7.4において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

67 mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.4)
6.7 mMMgCl2
0.1 mMDTT
20 μM鋳型DNA
33 μMdATP
33 μM[3H]dTTP

純度

SDS電気泳動で95%以上の純度を示す。
10 Uの本酵素と、1 μgのclosed circular(RF I)pBR322 DNAとを37℃、1時間反応させても、DNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

使用上の注意

  • 希釈による失活はないが、強く撹拌すると失活することがある。
  • 5’→3’exonuclease活性が含まれないため、ニックトランスレーション活性を示さない。
  • DNA Polymerase I と同じく、ddNTPを阻害されることなく取り込む。
  • T4 DNA Polymeraseに比べて、鋳型DNAの高次構造に対しても抵抗性が高い。
  • DNAに対する親和性が強く、過剰に用いるとaggregationが起こり、反応が阻害されることがある。
  • 5’-突出末端の修飾に用いると、filling後に1塩基余分に付加する場合がある。6)

用途

  • dideoxy法によるシーケンシング(Sanger法)3)
  • この用途には特に製品コード 2140AK, 2140BKが適している。
  • 二本鎖DNA末端の平滑化4)
  • Oligonucleotide directed mutagenesisにおける二本鎖DNA合成5)
  • random primerを用いたDNA標識

起源

Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Klenow fragment

触媒する反応

1.5'→3'DNA polymerase活性
鋳型、プライマー(DNA、RNA共に可)存在下でdNTPを基質とし、鋳型に相補的なDNAを5'→3'方向に合成する。

ddNTPによる拮抗阻害がかかりにくいのでM13 dideoxy法によるシーケンシングに用いられる。

2.一本鎖特異的3'→5' exonuclease活性

Klenowの3'→5'exonuclease活性は比較的弱い(T4 polの100~1000分の1)ので3'突出末端の平滑化には適さない。

一般的性質

  • 分子量
    68,000
  • サブユニット
    1分子中にZn2+を1分子含む一本鎖単純ポリペプチド
  • 至適pH
    pH7.4
  • 補因子
    Mg 2+
  • 安定性
    vortex等の撹拌により失活する(ピペッティングにより混合すること)

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注意事項
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