遺伝子導入

注意：マルチウェルプレートの場合、ウェル位置により導入率に差が生じることがある。できる限りプレート中央に近いウェルを使用すること。

1. 目的遺伝子を持つ組換えレトロウイルス液の原液、あるいは希釈液をRetroNectinコートプレート上に125～250 μl/cm²となるように加える。
2. 32℃で2,000×g、2時間の遠心を行い、RetroNectinへウイルス粒子を吸着させる。
3. プレート上が乾燥しないように注意しながら、ウイルス液を除去し、適当量のPBSまたは0.1～2%のアルブミン（BSAやHSA）を含むPBSを添加する（溶液は細胞へのウイルス感染直前まで除かない）。
4. 標的細胞懸濁液を調製する。適切な細胞濃度は標的細胞の大きさや増殖率によって異なる。細胞に応じて、0.05～5×10⁵ cells/cm²の範囲で検討する。
5. 3. で作製したウイルス結合プレートの溶液を除去し、速やかに細胞懸濁液を加える。
   注：標的細胞とウイルスベクターの接触を促す目的で、細胞添加後、遠心操作を行っても良い。
6. 37℃、5% CO₂インキュベーターで培養する。

☆RBV-Spin法による実験例