TransIT^®-mRNA Transfection Reagent

TransIT-mRNAは、培養細胞にRNAをトランスフェクションするための試薬である。RNAを直接細胞質に導入することにより、転写調節機能の影響を受けることなく発現を行うことが可能となる。本製品は、mRNAやウイルスRNAなど、様々なタイプのRNA（2～10 kb）を様々な細胞に効率よく導入することができる。また、細胞毒性が低く血清含有培地で使用できるため、トランスフェクション後の培地交換操作が不要で、操作性にも優れている。12-well plateを使用した場合、1 mlで最大500回、0.4 mlで最大200回使用することができる。

A	B	C

図1. TransIT-mRNAを用いたDC 2.4樹状細胞へのGFP mRNAの導入例
TransIT-mRNAを用いて、キャップ構造とpolyA配列を持ちGFPをコードするmRNAを、DC 2.4細胞に導入した。24-well plateで一晩培養後1×10⁵ cells/wellとなった細胞をトランスフェクションに用い、10時間後にGFPを検出した。
mRNAの添加量：（A）0.5 µg、（B）1 µg、（C）2.5 µg
Data courtesy of Kyle Phua (Principal Investigator: Kam W. Leong), Duke University

図2. TransIT-mRNAを用いた様々な樹状細胞へのGFP mRNAの導入例
マウス骨髄由来樹状細胞（BMDC）とマウス樹状細胞（JAWSII 及びDC 2.4）に、キャップ構造とpolyA配列を持ちGFPをコードするmRNA 1 μgをTransIT-mRNAを用いて導入した。
試薬：mRNA比TransIT-mRNA Reagent：Boost：mRNA = 1：1：1 (μl：μl：μg)
初代BMDC細胞、JAWSII 細胞及びDC 2.4細胞を24-well plateで一晩培養後、8×10⁵ cells/wellとなったものをトランスフェクションに用いた。トランスフェクションから8時間後にフローサイトメトリーで測定を行った。それぞれ、少なくとも3回の独立した実験を行った。
Data courtesy of Kyle Phua (Principal Investigator: Kam W. Leong), Duke University

図3. ルシフェラーゼmRNAの導入例
TransIT-mRNAを用いて、12-well plateで培養した各細胞に、キャップ構造とpolyA配列を持ちルシフェラーゼをコードするmRNAを導入した。トランスフェクションから約18時間後に細胞を回収し、ルシフェラーゼ活性を測定した。

A. Mock Transfection Control	B. LacZ mRNA Transfection

図4. TransIT-mRNAを用いたCHO-K1細胞へのLacZ mRNAの導入例
キャップ構造とpolyA配列を持ちLacZをコードするmRNAをTransIT-mRNAを用いてCHO-K1細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションから約18時間後にMirus社のβ-Galactosidase Staining Kitを用いてLacZが導入された細胞を染色した。
(A) トランスフェクションコントロール(mock)　(B) LacZ mRNA

iPS細胞作製のためのmRNAの導入にTransIT-mRNAを使用した例が報告されている。
Highly Efficient Reprogramming to Pluripotency and Directed Differentiation of Human Cells with Synthetic Modified mRNA. Warren et al. 2010. Cell Stem Cell. Volume 7, Issue 5, 618-630.

Innate Immune Suppression Enables Frequent Transfection with RNA Encoding Reprogramming Proteins.
Angel M, Yanik MF. 2010. PLoS One. Jul 23;5(7):e11756.

TransIT-mRNAを使用した高力価なウイルス産生
TransIT-mRNAとエレクトロポレーション法の比較
TransIT-mRNAで良好にトランスフェクションできた細胞株

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