1. | 細胞の穏やかな溶解と核の遠心沈降 |
2. | ヒストンに巻きついていないDNA部分をMicrococcal Nucleaseにより切断 |
3. | ヌクレオソームからProteinase K処理によりヒストンを除去 |
4. | DNA回収(別売のNucleoSpin Gel and PCR Clean-upなどのDNA精製キットを使用) |
[注意] | 本キットは、クロスリンク処理をした細胞のクロマチン断片化には適していない。 |
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操作の概略 |
1. | Cytoplasmic Lysis Buffer | 25 ml×2本 |
2. | Protease Inhibitor Cocktail (100 ×) | 550 μl |
3. | Micrococcal Nuclease (20 U/μl) | 50 μl |
4. | Micrococcal Nuclease Buffer (10× ) | 1 ml |
5. | RNase A (20 mg/ml) | 100 μl |
6. | 0.5 M EDTA | 100 μl |
7. | Proteinase K | 200 μl |
8. | LINE-1 qPCR Primer (10 μM each)* | 50 μl |
* リアルタイムPCRで相対定量解析する際に、ゲノムDNA量を補正するためのReferenceとして使用する。ヒトゲノムDNA検出用プライマーのため、他の生物種では使用できない
より簡便なレジオネラ属菌DNA抽出試薬
PCR産物の精製にもDNAのゲル抽出にも対応
採水当日に、死菌も含めたリスク評価が可能
レジオネラ属菌用EMA試薬(LC EMA-qPCR法)
採水翌日に、確実な生菌選択的検出が可能