ゲノムDNA上のヌクレオソームの位置の解析に
- ヌクレオソームに巻きつくDNAを回収
- ゲノムDNA上でのヌクレオソームの位置解析に便利
- 0.5～2×106個の細胞から約90分で調製可能
製品説明
本製品は、動物培養細胞からヌクレオソームを調製するためのキットである。調製ヌクレオソームから抽出されたDNAをリアルタイムPCR、高速シーケンスで解析することにより、ゲノム上でのヌクレオソーム位置を解析することができる。
＜操作の概要＞
回収されたDNAはヌクレオソームを形成していたゲノムDNA領域に該当し、ヒストンに巻き付いていなかったゲノムDNA領域はMicrococcal Nucleaseにより切断される。
＜操作の概要＞
| 1. | 細胞の穏やかな溶解と核の遠心沈降 |
| 2. | ヒストンに巻きついていないDNA部分をMicrococcal Nucleaseにより切断 |
| 3. | ヌクレオソームからProteinase K処理によりヒストンを除去 |
| 4. | DNA回収（別売のNucleoSpin Gel and PCR Clean-upなどのDNA精製キットを使用） |
回収されたDNAはヌクレオソームを形成していたゲノムDNA領域に該当し、ヒストンに巻き付いていなかったゲノムDNA領域はMicrococcal Nucleaseにより切断される。
| ［注意］ | 本キットは、クロスリンク処理をした細胞のクロマチン断片化には適していない。 |
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| 操作の概略 |
内容
（50回分）
| 1. | Cytoplasmic Lysis Buffer | 25 ml×2本 |
| 2. | Protease Inhibitor Cocktail (100 ×) | 550 μl |
| 3. | Micrococcal Nuclease (20 U/μl) | 50 μl |
| 4. | Micrococcal Nuclease Buffer (10× ) | 1 ml |
| 5. | RNase A (20 mg/ml) | 100 μl |
| 6. | 0.5 M EDTA | 100 μl |
| 7. | Proteinase K | 200 μl |
| 8. | LINE-1 qPCR Primer (10 μM each)* | 50 μl |
* リアルタイムPCRで相対定量解析する際に、ゲノムDNA量を補正するためのReferenceとして使用する。ヒトゲノムDNA検出用プライマーのため、他の生物種では使用できない
保存
コンポーネント 1、2 ： 4℃
その他のコンポーネント ： －20℃
その他のコンポーネント ： －20℃
本製品以外に必要なもの（主なもの）
サーマルサイクラー
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient（製品コード TP600）など
DNA 精製キット
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up（製品コード 740609.10/.50/.250）など
電気泳動装置
Mupid-exU（製品コード EXU-1）など
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient（製品コード TP600）など
DNA 精製キット
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up（製品コード 740609.10/.50/.250）など
電気泳動装置
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