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CRISPR/Cas9でのノックインはドナーDNAを作製し、主にCas9-sgRNA複合体もしくはCas9-sgRNA発現ベクターと共に導入することで起こる。
ドナーDNAとして二本鎖DNA(dsDNA)よりも一本鎖DNA(ssDNA)を使用したほうが、ランダムインテグレーションが起きにくく、細胞毒性が低いなど多くの利点があることが近年示されているが、長鎖のssDNAは作製が難しいため使用が制限されていた。
本製品は、CRISPR/Cas9のノックインドナーDNAとして使用できる、500 bases~5 kbまでの長鎖ssDNAを調製するためのシステムである。独自技術のStrandase処理により、PCR産物のセンス鎖またはアンチセンス鎖を選択的に分解することで、簡単な操作で最終的にセンス鎖もしくはアンチセンス鎖のssDNAが調製できる。
本製品にはssDNAを50回(センス鎖、アンチセンス鎖それぞれ25回)作製するために必要な試薬と、ssDNA精製用のNucleoSpin Gel and PCR Clean-upおよびバッファーが含まれている。
反応系の改良により、従来製品Guide-it Long ssDNA Production System(製品コード 632644:終売)よりもStrandase処理の効率がさらに改善されており、これまで困難だったターゲットからも、より効率的なssDNA調製が可能となっている。
PrimeSTAR Max Premix (2X) | 625 μl×4 |
Strandase Mix A | 250 μl |
Strandase A/B Buffer (10X) | 250 μl |
Strandase Mix B | 50 μl |
Digestion Enhancer (5X) | 500 μl |
RNase Free Water | 1 ml×5 |
2-kb Control Template (2 ng/μl) | 50 μl |
Control Primer Mix (16 μM) | 50 μl |
Guide-it Long ssDNA Strandase Kit v2(製品コード 632667) | -20℃ |
NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up(製品コード 740609.50) | 室温 |
Buffer NTC(製品コード 740654.100) | 室温 |
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