製品説明
NucleoSpin Gel and PCR Clean-upは、PCR産物の精製に加え、アガロースゲルからのDNA断片の精製にも利用できる製品である。本製品には、どちらの精製法にも使用できるバッファーが含まれている。
酵素反応液(PCR反応液など)からの精製では、酵素、ヌクレオチド、塩類、その他不純物を迅速、簡単に除くことができる。PCR産物の精製操作は、PCR反応液にBinding Buffer NTIを加え、NucleoSpin Gel and PCR Clean-upカラムへアプライし、Wash Buffer NT3で洗浄するという簡単な操作である。アガロースゲルからの抽出は、ゲルをBinding Buffer NTIで溶解後、カラムへアプライし、遠心、洗浄を行う。精製DNAはElution Buffer NE(5 mM Tris-HCl、pH8.5)で抽出される。
Binding Buffer NTIにはpH indicatorが含まれており、サンプルとBinding Buffer NTIを混合した溶液の色により、サンプルのpHがカラムの結合に適しているかを容易にチェックすることができる。
原理 | シリカメンブレン法 |
形状 | ミニスピンカラム |
サンプル量 | <400 μl PCR反応液 <400 mg TAE/TBEアガロースゲル |
精製サイズ | 50 bp~20 kb |
回収率 | 70~95% |
A260/280 | 1.8~1.9 |
溶出液量 | 15~30 μl |
精製時間 | 10分 |
結合容量 | 25 μg |
内容
・Binding Buffer NTI
・Wash Buffer NT3 (Concentrate)
・Elution Buffer NE
*
・NucleoSpin Gel and PCR Clean-up Columns (yellow rings)
・Collection Tubes (2 ml)
* 組成:5 mM Tris-HCl、pH 8.5
本製品以外に必要な試薬、機器(主なもの)
試薬
・96~100%エタノール
器具
・1.5 mlマイクロチューブ
・ピペットチップ(滅菌済)
・ピペット
・微量高速遠心器
・ヒートブロック
保存
室温
操作手順
pH indicator
PCR反応液またはゲルとBinding Buffer NTIを混合した溶液において、カラム結合のための至適pHは5~6である。Binding Buffer NTIにはpH indicatorが含まれているため、溶液の色によって至適pHかどうかをチェックできる。至適pHでない場合、Buffer NTIまたは4M 酢酸ナトリウム(NaAc, pH5.0)または少量HClを溶液が黄色になるまで加える。
yellow, pH<6 | green, pH<6~7 | blue, pH>7 |
サンプルのpHが至適 | サンプルのpHが少し高い →pH調整が必要 | サンプルのpHが高い →pH調整が必要 |
用途
- PCR産物の精製
- アガロースゲルからのDNA抽出
- 精製DNAはクローニング、シーケンス、PCR、制限酵素処理などに利用可能
- 反応液の濃縮、脱塩(サポートプロトコール)
- 150 bases以下のssDNA、RNAのクリーンアップ(サポートプロトコール):別途 Buffer NTC(製品コード 740654.100)が必要
- SDS含有サンプルのクリーンアップ(サポートプロトコール):別途 Buffer NTB(製品コード 740595.150)が必要
- アガロースゲルからのRNA抽出(サポートプロトコール):別途 Buffer NTC(製品コード 740654.100)が必要
- ポリアクリルアミドゲルからのDNA抽出(サポートプロトコール):別途 diffusion bufferの調製が必要
NucleoSpinはマッハライ・ナーゲル社の登録商標です。