cDNAの未知の5'領域を高効率でクローニング
製品説明
本製品は、RACE（Rapid Amplification of cDNA End）法を用いてmRNAの5’部分の増幅を行うためのCore Setである。mRNAから完全長のcDNAを得ることはきわめて重要であるが、非常に困難であることが多い。このような場合、得られたcDNAの情報をもとにさらに上流や下流をクローニングする方法がRACE法である。本製品を用いることにより、inverse PCRを利用して未知の5’末端領域を増幅し、5’-RACE法を効率よく行うことができる。本製品はRNAからのcDNA合成、およびcDNAのコンカテマー化(あるいは環状化）に必要なすべての試薬を含んでいる。
内容
| AMV Reverse Transcriptase XL（5 U/μl） | 10 μl |
| RNase Inhibitor （40 U/μl） | 10 μl |
| 10×RT Buffer | 15 μl |
| RNase Free dH2O | 1 ml |
| RNase H （60 U/μl） | 10 μl |
| 5×Hybrid RNA Degradation Buffer | 150 μl |
| T4 RNA Ligase （40 U/μl） | 10 μl |
| 5×RNA (ssDNA) Ligation Buffer | 80 μl |
| 40％ PEG #6000 | 200 μl |
| Positive Control RT-Primer （200 pmol/μl）* | 10 μl |
| Positive Control 1st Primer Pair （各primer 20 pmol/μl）* | 10 μl |
| Positive Control 2nd Primer Pair （各primer 20 pmol/μl）* | 10 μl |
| Positive Control RNA （10 ng/μl） | 10 μl |
* Positive Control RNAを用いて増幅するためのプライマー
保存
－20℃
各プライマーの配列
| Positive Control RT-Primer | 5’-(P)AAAATGACCCAG-3’ |
| Positive Control 1st Primer Pair | S1：5’-AGCGCTTGTTTCGGCGTGGGTATGGTG-3’ A1：5’-CTGGCGATGCTGTCGGAATGGACGATA-3’ |
| Positive Control 2nd Primer Pair | S2：5’-ACCTACTACTGGGCTGCTTCCTAATGC-3’ A2：5’-TAGATTTCATACACGGTGCCTGACTGC-3’ |
注意）上記のプライマーは、キットに含まれるPositive Control RNAを用いて増幅するためのプライマーです。
5’-RACE法を行うために本セット以外に必要な試薬
- TaKaRa Taq （製品コード R001A/B/C）またはTaKaRa Ex Taq （製品コード RR001A/B/C）またはTaKaRa LA Taq （製品コード RR002A/B） など
- 5’末端リン酸化RT-プライマー（逆転写反応に使用）
- 1st PCR用プライマーペア（1st PCRに使用）
- 2nd PCR用プライマーペア（2nd PCRに使用）
- 注意事項
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