Retrovirus Packaging Kit

本製品は目的遺伝子を組み込んだ組換えレトロウイルスベクタープラスミドを2種類のパッケージングベクターとともにリン酸カルシウム法により同時に細胞に導入するだけで、一過性に高タイターの組換えレトロウイルス粒子を産生できるキットである。キットにはパッケージングベクターとしてgag-pol発現ベクターとenv発現ベクター（エコトロピックまたはアンフォトロピック）が含まれており、ラット、マウスの細胞（エコトロピックの場合）または多数の哺乳動物細胞（アンフォトロピックの場合）に感染可能な組換えレトロウイルスを産生できる。Ψ（パッケージングシグナル）とLTR配列を持つ組換えレトロウイルスベクタープラスミドと共に、本パッケージングベクターを添付のトランスフェクション試薬を用いてG3T-hi細胞、293T細胞等に共導入することによって、48時間後には一過性に高タイター（通常、10⁵～10⁷感染ユニット/ml）の組換えウイルス粒子が産生される。
パッケージベクターはgag-polまたはenv以外にはレトロウイルス由来の配列を持たないため、組換えレトロウイルスベクターとの組換えによる自己複製能のあるレトロウイルス産生の可能性は非常に低くなっている。


組換えレトロウイルスの作製の概略

（10回分）
本製品には、2種類のパッケージングベクターと、トランスフェクションに必要な試薬が含まれている。

1. pGP Vector（1 μg/μl）	50 μg（50 μl）
2. pE-eco（または ampho） Vector（1 μg/μl）	50 μg（50 μl）
3. Transfection Buffer	500 μl ×10
4. 2 M CaCl2	620 μl
5. 25 mM Chloroquine	40 μl

－20℃
ただし、キット内容3, 4, 5は融解後4℃で保存する。

1. 器具・装置

• 安全キャビネット
• 細胞観察用顕微鏡
• CO₂インキュベーター
• -80℃フリーザー
• 滅菌済ピペット
• フィルター付滅菌済チップ
• 5 mlポリスチレン丸底チューブ
• 6 cm細胞培養用シャーレ
• 0.45 μm滅菌済フィルター（低吸着タイプ）
• 2 ml滅菌済チューブ（ウイルス保存用）
• 電動ピペッター

2. 試薬類

• 組換えレトロウイルスベクタープラスミド（高純度に精製されたもの）
• Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) 4.5 g/L Glucose with L-Glutamine (584 mg/L)（Lonza Code. 12-604F/12-604Q）
• Fetal Bovine Serum（FBS）
• Panicillin-Streptomycin Mixture（Lonza Code. 17-602E）
• Trypsin/EDTA (1X)（Lonza Code. 17-161E）
• レトロウイルス調製細胞G3T-hi細胞（製品コード 6163)、293T細胞 他
• 滅菌精製水

本製品をご利用の際は、以下の点にご注意ください。

• 本製品の使用はすべて研究用に限定されています。臨床目的での使用および生体外診断に使用することはできません。（本製品により得られた生物材料を第三者に譲渡することもできません。）また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
• 本製品を研究目的以外に使用される場合は、事前に弊社にお問い合わせください。商業目的に使用される場合は、個別にライセンス契約の締結が必要です。
• 本レトロウイルスベクターの系によって生産されるウイルス上清液は挿入断片によっては危険なウイルスを含む恐れがあるため、組換えレトロウイルスの生産と取扱いには、適切な処置をとる必要があります。ご利用の際は、文部科学省の定める省令「研究開発等に係る遺伝子組換え生物等の第二種使用等に当たって執るべき拡散防止措置等を定める省令」平成16年文部科学省・環境省令第1号および組織内の安全委員会の指示に従って行ってください。
• 本製品の使用によって生じたいかなる事故、損害についても、弊社では責任を負いかねますので、ご了承の上ご使用ください。