Cellartis^® 3i mES/iPSC Culture Medium

Cellartis 3i mES/iPSC Culture Mediumは、自己複製能力をground stateに保ったままで、マウスES細胞の樹立、維持、増殖に使用できる完全合成細胞培養用培地である（組成は非公開）。
本培地には分化誘導シグナルを抑え、刺激性サイトカイン無しに多能性を維持しながら増殖させる働きをする3種類の低分子阻害剤が含まれている。そのため、本培地は多分化能の研究のために利用される。また、通常条件下ではES細胞を樹立しにくいマウス種からES細胞を得るときにも使用できる。Cellartis 3i mES/iPSC Culture Mediumで培養されたマウスES細胞は、LIF（Leukemia Inhibitory Factor）、BMP（Bone Morphogenetic Protein）の存在下での培養と同程度の倍加時間で増殖を続け、さらに、より高い多能性クローン形成能を示す。
さらにC57BL/6NマウスでのGerm-line transmission効率が良好であることも報告されている。（参考文献2）

Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium

G-MEMベースの慣用培地

Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium、または慣用培地で培養したマウスES細胞E14Tg2A株（左）とアルカリホスファターゼ染色画像（右）
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Mediumで培養した細胞は、ムラのない染色像から均一な未分化細胞であることが分かる。
（弊社比較データ）

3i mES/iPSC＋LIF

A社培地＋LIF

ジーンターゲティングを目的として、Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium＋LIFおよびA社培地＋LIFで10継代培養したマウスES細胞（C57BL/6Nマウス由来）を8細胞期胚（CD1(ICR)）にインジェクションし、翌日移植して生まれてくるマウス個体の毛色にてキメラ率を検証した。
その結果、Cellartis 3i mES/iPSC Culture Mediumを使用した場合、マウスは全てC57BL/6N由来の黒い毛色であり、キメラ率が良好であることが確認できた。

本データは、東京大学　国際高等研究所　ニューロインテリジェンス国際研究機構
鵜飼 英樹 先生よりご提供いただきました。

• Cellartis mES/iPSC Culture Basal Medium　　　　200 ml
• Cellartis 3i mES/iPSC Supplement （DMSO含有）　200 μl

1. Cellartis mES/iPSC Culture Basal Mediumを遮光し、37℃ウォーターバスもしくは4℃保冷庫で融解する。
   37℃ウォーターバスでの融解は、暖め過ぎないよう注意する。4℃保冷庫での融解は、沈殿が完全になくなるまで融解する。
2. Cellartis 3i mES/iPSC Supplementを遮光し、室温で融解後（30分以内）スピンダウンした後、融解したCellartis mES/iPSC Culture Basal Mediumに無菌的に全量添加し、均一になるまで混合する。フィルター滅菌は避ける。

1. 0.1％ ゼラチン（Type A）溶液（PBS(-/-)に溶解）を培養容器に加えて室温もしくは37℃で30分間以上静置し、培養面をコーティングする。
   （もしくは37℃追加、15分を30分に変更）
2. 0.01％ ポリ-L-オルニチン溶液を培養容器に加えて、37℃で30分間以上静置した後、ポリ-L-オルニチン溶液を除き、PBS(-/-)で2回洗浄する。
   その後、10 μg/ml ラミニン溶液（PBS(-/-)に溶解）を加えて、37℃で3時間以上静置して、培養面をコーティングする。

※ 1、2 ともに培養容器の培養面が完全に浸る液量を加えてください。
※ 細胞を播種する直前にコーティング剤を除去してください。
※ ポリ-L-オルニチン溶液は水溶液が市販されています。

1. The ground state of embryonic stem cell self-renewal.
   Ying QL, Wray J, Nichols J, Batlle-Morera L, Doble B, Woodgett J, Cohen P, Smith A (2008) Nature 453:519-523.
2. Three Inhibitors of FGF Receptor, ERK, and GSK3 Establishes Germline-Competent Embryonic Stem Cells of C57BL/6N Mouse Strain With High Efficiency and Stability.
   Kiyonari H, et al. (2010) Genesis 48:317–327.
3. Effect of different culture conditions on establishment of embryonic stem cells from BALB/cAJ and NZB/BINJ mice.
   Iijima S, et al. (2010) Cell Reprogram. 12(6):679-688.