ノロウイルス（GI / GII）遺伝子型判別用PCRキット Ver.2

本製品は、RT-PCRによりノロウイルスのRdRp領域の一部とVP1領域の一部を含む遺伝子領域を増幅するための試薬、およびPCRにより得られた増幅産物のシーケンスのためのプライマーからなるキットです。
本製品を使用して得られた増幅産物に対して塩基配列解析を行い、得られた塩基配列とデータベース上の配列との相同性検索により、ノロウイルスの遺伝子型判別を行います。
本製品のプライマーを用いることで、国立感染症研究所「病原体検出マニュアル ノロウイルス（第1版）令和元年6月（以下、病原体検出マニュアル）」と同様の領域を解析できます（Dual typing法に対応）。
本製品は病原体検出マニュアルに収載されたDual typing法のプライマー配列に独自の改良を加え、PCR増幅の成功率を向上させました。

※本製品の製品化にあたっては、群馬パース大学大学院 木村博一教授に監修いただきました。

• プライマー配列の改良により網羅性が大きく向上！
  病原体検出マニュアルに収載されたDual typing法のプライマー配列に独自の改良を加えたことにより、高温条件でのPCR増幅を実現し、各種遺伝子型に対する網羅性が向上しました。
  詳細なアプリケーションデータはこちら
• 病原体検出マニュアルに収載されたDual typing法に対応
  本キットのプライマーを用いることで、病原体検出マニュアルと同様の領域を解析できます。
  
  Dual typing法
  RdRp（RNA-dependent RNA polymerase）領域の一部とcapsid領域の一部（VP1）の両方の遺伝子型をタイピング可能な手法。
  ◆ RdRp領域とVP1領域の間（ジャンクション領域）でゲノムの組換えが生じる。
  ◆ この組換えがウイルスの流行に影響することが示唆されている（GII.2[P16]等）。
  　⇒キメラウイルスの確認にはVP1領域だけでなくRdRp領域を含めたタイピングが必要
  
  
• 1ステップRT-PCRで操作簡便
  上記Dual typing法は、病原体検出マニュアルで2ステップRT-PCR法が示されていますが、本キットでは1ステップRT-PCR法により、cDNA合成とPCR増幅が同一チューブ内で完了します。
• オールインワン・キットなのですぐに使用できます。
  PCR増幅に必要な試薬とシーケンス用プライマーをセットにしており、すぐにご利用いただけます。

Norovirus (GI) RT-PCR Kit for genotyping Ver.2（製品コード RC122A）

Norovirus (GII) RT-PCR Kit for genotyping Ver.2（製品コード RC123A）

＊1 基質等を含みます。
＊2 酵素等を含みます。

－20℃

キットに含まれるSequencing Primer F (NV)-2を使用して、得られた精製増幅産物のシーケンス解析（片鎖解析）を行う。必要に応じて、Sequencing Primer R (NV)-2も使用し両鎖解析を行うと、精度の高いシーケンスデータが得られます。

※ シーケンス解析には、タカラバイオ受託サービス「プレミックスシーケンス解析」のご利用をお勧めします。
［プレミックスシーケンス解析にご依頼いただく場合］
以下の混合物を準備後、1つのウェルに分注します。

• 精製増幅産物を1反応につき10～120 ngご用意ください。（1サンプルについて最大2反応となりますので、最大20～240 ngの精製増幅産物が必要となります。）
• 1つの反応ウェルについて1つのSequencing Primer (7.5 pmol/μl)を1 μl加え、全量を15 μl／ウェルとなるように調製いただき、ご送付ください。
  詳細は「プレミックスシーケンス解析（8連チューブ／96ウェルプレート）」をご参照ください。

※「プレート単位シーケンス解析」をご利用される場合はこちらをご覧ください。
※ご自身でシーケンスを実施することも可能です。その場合、キットのシーケンス用プライマーは7.5 pmol/μlとなっていますので、適宜使用量を調整してご使用ください。

得られた塩基配列情報とデータベース上の配列との相同性検索を行い、その結果によりNoVの遺伝子型を判別します。
＜参考情報＞
RIVM ( The Dutch National Institute for Public Health and the Environment)
Norovirus Typing Tool： https://www.rivm.nl/mpf/typingtool/norovirus/