P1レベルで高効率に遺伝子導入できるウイルスベクター

アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター作製

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特長

  • 血清型1、2、5、6から目的にあったAAVベクターを選択可能
  • タカラバイオ独自のAAVベクター抽出法により高純度ウイルスベクター液を作製
  • 1012 vg(vector genomes)以上の高力価ウイルスベクターをご提供

概要

アデノ随伴ウイルスベクター作製キットAAVpro Helper Free System(製品コード 6230:AAV2 など) を用いて、目的遺伝子を搭載した血清型1、2、5、6のアデノ随伴ウイルスベクターを、ヘルパーウイルスを使用せずに安全に作製いたします。
AAV2ベクターの作製には力価向上効果のあるmiRNAの発現カセットを含むpRC2-mi342プラスミドDNAを使用しています。また、タカラバイオ独自のウイルスベクター抽出法により、高力価、高純度のアデノ随伴ウイルスベクターを作製いたします。

CRE Recombinase発現AAVベクター、LacZ発現AAVベクターについても専用のアデノ随伴ウイルスベクター作製キットAAVpro Helper Free System(AAV2-CRE Recombinase)(製品コード 6652)AAVpro Helper Free System(AAV2-LacZ)(製品コード 6655)などを用いて作製いたします。

アデノ随伴ウイルスベクターを用いた遺伝子導入法は、以下の利点を持ち、多くの遺伝子導入実験に利用されています。

  1. 拡散防止措置P1の施設でも取扱いが可能
  2. 増殖/非増殖のいずれの細胞にも遺伝子導入が可能
  3. 免疫原性が低く、動物個体への遺伝子導入に最適
  4. 非分裂細胞にて長期間の発現が可能

AAV2ベクター作製の流れ

■チラシをご覧ください。
ウイルスベクター作製サービス

サービス内容

ステップ毎にご注文いただけます。
  1. アデノ随伴ウイルス(AAV1、2、5、6)ベクターの作製
    • pAAV-GOIプラスミドDNA、pRCプラスミドDNAおよびpHelperプラスミドDNAをHEK293細胞またはHEK293T細胞へトランスフェクション
    • タカラバイオ独自の抽出法により、凍結融解法や超音波破砕法と比較して高純度かつ高効率にAAVベクターを抽出
    • 培養細胞への感染実験(in vitro実験)を行うために十分な1012 vg以上のウイルスベクター液を調製
    • AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2(製品コード 6233)を使用し、アデノ随伴ウイルスベクターゲノムの両末端に存在するITR(Inverted Terminal Repeat)をターゲット配列としてAAVゲノムを定量
      ※タカラバイオ取扱いベクター以外を使用する場合は、別途ご相談ください。
  2. アデノ随伴ウイルス(AAV1、2、5、6)ベクターの精製

【オプションサービス】
プラスミドDNA構築
  • 目的遺伝子を挿入した発現プラスミドDNA(pAAV-GOI vector)を作製*1
  • 挿入遺伝子のサイズ*2、挿入接続部位の塩基配列を確認
    *1 pAAV-CMVプラスミドを使用
    *2 挿入可能な遺伝子長は2.5 kbまで
ウイルスベクター調製用プラスミドDNAの大量調製

価格・納期

サービス項目
参考価格 参考納期
1. アデノ随伴ウイルスベクターの作製¥950,000~6週間
2-1. アデノ随伴ウイルスベクターの精製
  (細胞ペレットからAAVを回収)
¥550,000~6週間
2-2. アデノ随伴ウイルスベクターの精製
  (細胞ペレットおよび培養上清からAAVを回収)
¥1,400,000~6週間
2-3. アデノ随伴ウイルスベクターの精製(超遠心)別途ご相談
(オプション)
プラスミドDNAの作製
¥170,000~/件
*遺伝子長で変動
4~7週間

納品物

・アデノ随伴ウイルスベクター液
※血清型、搭載遺伝子、製造スケールで変動
1012 vg~
・精製アデノ随伴ウイルスベクター作製の場合
※血清型、搭載遺伝子、製造スケールで変動
1011 vg
・作業報告書

ご注文方法

  • 以下のフォーマットにご記入のうえ、依頼書記載のFAX番号へご送付ください。

  • 以下の手続きの後に実際のサービスを開始します。
    手続きに必要な書類(<>内)をダウンロードしてご使用ください。
    1. 挿入遺伝子に関する情報を開示ください。 <遺伝子情報書式用紙 ver.7
      タカラバイオの遺伝子組換え実験安全委員会への申請に必要な情報(遺伝子産物の性質、塩基配列等)をお知らせいただきます。
      電子ファイルに必要事項をご記載後、こちらにメールでお送りください。フラッシュメモリやCD-R等の媒体での郵送も受け付けます。
      なお、配列情報の郵送、メール送信の際には情報漏洩に充分ご注意ください。(弊社では責任を負いかねます)
      情報の扱いには十分注意を払っております。また、情報開示にあたり、秘密保持契約を必要とされる場合はご用意いたします。
    2. タカラバイオの安全委員会において、開示いただいた遺伝子情報をもとに、必要とされる物理的封じ込めレベルを判断し、折り返しご連絡させていただきます。
      P1レベルで扱うことができない遺伝子の場合、サービスをお断りすることになります。

受入サンプル

・プラスミドDNAの構築からの場合プラスミドDNA3 μg以上
・アデノ随伴ウイルスベクターの作製からの場合各種プラスミドDNA1 mg以上

ご留意事項

本作業で作製したアデノ随伴ウイルスベクターを商業目的で使用される際は、個別にライセンス契約の締結が必要となる場合があります。
本製品ご利用の際は省令および組織内の組換えDNA実験安全委員会の指示に従い、安全には十分ご注意ください。
アデノ随伴ウイルスベクターの取り扱いは、挿入されている遺伝子の全塩基配列が既知で、かつ、その遺伝子が毒性あるいは病原性等を示さず安全であると判断できる場合に限りP1レベルで扱うことができます。本サービスでは、P1レベルで扱うことのできる場合のみ、ご依頼をお受けしています。
お客様よりご提供いただいたサンプル・情報および納品物の複製物は、別途期限を定めている場合を除き、業務終了後3ヵ月を経過すると順次廃棄いたします。ご了承ください。

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注意事項
  • 本受託サービスは、すべて研究目的として作業を行います。納品物を試験研究目的以外へご使用される場合、弊社では納品物に起因する損失・損害等については一切の責任を負いかねます。納品物によっては、その構成物(例えば、ベクター、蛍光色素など)の使用に制限がある場合がありますのでご注意ください。
  • 納品物に起因して、直接的もしくは間接的に発生したお客様の損害については、明らかに弊社の責に帰すべき事由による場合を除いて、弊社は一切その責任を負いません。

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