TaKaRa Taq™ HS PCR Kit, UNG plus

エンドポイントPCRにおいて、特に食品・環境検査など同じPCR反応を繰り返し行う場合に、キャリーオーバーによる偽陽性が生じる危険性が高い。本製品は、継続的に使用することにより、このようなキャリーオーバーによる偽陽性を防止するための製品である。
本製品では、dTTPの代わりにdUTPを基質として用いて、ホットスタートPCR酵素TaKaRa Taq HSによる増幅を行う。PCR反応液調製後、ウラシルを含むDNAを分解する酵素であるUNG（Uracil - N - glycosylase）を作用させると、ウラシルを含む前段階におけるPCR産物はUNGにより分解されるが、あらたに加えられた鋳型は分解されないため、キャリーオーバーの影響を受けずにPCR増幅を行うことができる。

UNGによる分解は次のように起こる。PCR前の25℃、10分の反応で、PCR反応液に混入しているウラシルを含むPCR産物のデオキシリボースとウラシル塩基の間のN- グリコシド結合がUNGにより加水分解され、脱ピリミジン部位が生じる。続いて95℃、2分の熱処理により、UNGが失活すると同時に混入DNA断片は脱塩基部位でリン酸バックボーンの加水分解により、切断、分解される。UNGは、一本鎖と二本鎖のウラシルを含むDNAを加水分解するが、RNAに対しては作用しない。

R013S（50回分、PCR 50 μl反応系）

1．	TaKaRa Taq HS（5 U/μl）	12.5 μl
2．	10×PCR Buffer for UNG plus*1（10×）	250 μl
3．	dU plus dNTP Mixture*2（12.5×）	200 μl
4．	UNG（2 U/μl）	25 μl

R013A（200回分、PCR 50 μl反応系）

1．	TaKaRa Taq HS（5 U/μl）	50 μl
2．	10×PCR Buffer for UNG plus*1（10×）	1 ml
3．	dU plus dNTP Mixture*2（12.5×）	800 μl
4．	UNG（2 U/μl）	100 μl

*1	Mg2＋濃度：22.5 mM（10×） 本製品は、dUTP がdTTPの3倍濃度に設定されているため、全体的にdNTP濃度が高くなる。MgCl2とdNTPの量のバランスを保つため、通常のTaKaRa Taq Hot Start Version（製品コード R007A）に添付の10×PCR Buffer（Mg2＋ plus）よりMg2＋濃度が高くなっている。
*2	dU plus dNTP Mixture：以下の組成の水溶液（ナトリウム塩）である。 dUTP 7.5 mM dATP 2.5 mM dGTP 2.5 mM dCTP 2.5 mM

－20℃

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