ゲノム編集後の変異導入効率確認キット

Guide-it™ Mutation Detection Kit

  • CRISPR/Cas9などによるゲノム編集後の変異導入確認に
  • 細胞のゲノムに導入された挿入、欠失をPCRベースの手法で簡単に検出
  • 細胞からの直接増幅が可能で、他社アッセイキットより迅速、高効率
  • 検出に必要な酵素に加えPCR酵素とバッファーが入った便利なキット
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
CLN 631443 Z1443N Guide-it™ Mutation Detection Kit
  • ライセンス
100回 ¥88,000
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631448 Z1448N Guide-it™ Mutation Detection Kit
  • ライセンス
25回 ¥28,000
Cas9タンパク質プレゼントキャンペーン実施中!
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

Guide-it Mutation Detection Kitは、CRISPR/Cas9、zinc-finger nucleases(ZFNs)、transcription-activator-like effector nucleases(TALENs)などの人工ヌクレアーゼを用いた変異導入を確認するためのキットである。細胞ゲノム上に導入された挿入や欠失をPCRベースの手法で簡単、迅速に検出できる。
本製品では、Terra PCR Direct Polymerase Mixを用いることで、DNA精製を行うことなく、細胞ライセートから直接ターゲット配列を増幅することができる。
操作は、目的の細胞プールからターゲット配列を含む領域をPCR増幅し、増幅産物の変性、アニーリングを行った後、Guide-it Resolvaseによる切断処理を行う。アニーリングによってミスマッチが生じると、Guide-it Resolvaseによる切断が起こる。電気泳動での切断断片の確認により、変異を検出できる。
本製品には100回/25回の増幅と切断に必要な試薬が全て含まれている。また、本製品にはPositive Control DNAが含まれているので、反応系に問題がないかの確認も行える。
変異検出
図1. Guide-it Mutation Detection Kitを用いた変異検出

Guide-itとSurveyorアッセイの比較
図2. Guide-itとSurveyorアッセイの比較
Cas9を発現するプラスミド、及びAAVS1 locusに特異的なsgRNAをコードするプラスミドを用いて293T細胞へトランスフェクションし、48時間培養した細胞をトランスフェクションしていない細胞と6段階の比率で混合した後、変異検出を行った。Terra PCR Direct Polymerase Mixを用いてターゲットとなるAAVS1 locusを含む領域を増幅し、PCR産物を精製後、Guide-it Resolvase、またはCel1 enzyme(Surveyorアッセイ)で切断し、電気泳動を行った。Guide-itでは変異を容易に検出できたが、Surveyorアッセイでは明らかにスメアーが生じており、切断効率の検出、及び低レベルの変異の検出が困難であった。
* lane 1-6 : 100%, 80%, 60%, 40%, 20%, 0%(トランスフェクションした細胞の割合)

内容


100回(製品コード 631443)25回(製品コード 631448)
Extraction Buffer 15 ml×45 ml
Extraction Buffer 22 ml500 μl
Guide-it Resolvase100 μl25 μl
Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/µl)100 μl25 μl
2×Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)1 ml×3750 μl
PCR-Grade Water1 ml×51 ml
Positive Control DNA for Resolvase75 μl75 μl

保存

-20℃

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