逆転写反応至適温度が高いRT-PCR用キット
製品説明
本製品は、RNAをcDNAに変換した後にPCRを行う2ステップRT-PCRのためのキットである。BcaBEST PolymeraseはBacillus caldotenax由来のDNA Polymerase活性と逆転写活性を合わせもつ酵素である。この逆転写活性によるRNAからのcDNAを合成、およびLA PCRテクノロジーより生まれたBca-Optimized TaqによるcDNAのPCR増幅を一本のチューブ内で行うことができる。BcaBEST Polymeraseを用いたRT-PCRでは逆転写反応至適温度が65℃と高く、複雑な二次構造を持つRNAからcDNAを合成するのに有効である。
内容
| 1. | BcaBEST Polymerase （22 U/μl） | 50 μl |
| 2. | RNase Inhibitor （40 U/μl） | 25 μl |
| 3. | Random 9 mers （50 μM） | 50 μl |
| 4. | Oligo dT Primer （50 μM） | 50 μl |
| 5. | RNase Free dH2O | 1 ml |
| 6. | Bca-Optimized Taq （5 U/μl） | 25 μl |
| 7. | 2×Bca 1st Buffer | 1.25 ml×2 |
| 8. | 5×Bca 2nd Buffer | 800 μl |
| 9. | dNTP Mixture （各10 mM） | 50 μl |
| 10. | MgSO4（25 mM） | 500 μl |
| 11. | Control F-1 Primer（20 μM）*2 | 25 μl |
| 12. | Control R-1 Primer（20 μM）*3 | 25 μl |
| 13. | Positive Control RNA（2×105 copies/μl）*4 | 25 μl |
*1 [10 μl逆転写反応 → 50 μl PCR反応] の100回分
*2 Positive Control RNA用上流プライマー
*3 Positive Control RNA用下流プライマー
*4 pSPTet3 プラスミドの転写 polyA＋ RNA
保存
－20℃
BcaBEST RNA PCRの原理
図1 BcaBEST RNA PCRの原理
図2 RNA PCRのフローチャート
* gradientの操作は、ターゲットによっては必要がない場合がある。
特長
本キットは、BcaBEST PolymeraseによるRNAからのcDNA合成を行い、続けて同一チューブ内でBca-Optimized TaqによるPCR増幅を行う。RNAからcDNA合成を行う際のプライマーとしてRandom 9 mers、Oligo dT Primer、あるいはPCRの際のアンチセンスプライマーに相当するcDNAの下流部分の配列を有する特異的なプライマー（特異的下流PCRアンチセンスプライマー）を用いることができる。
| RNAテンプレート | 全般（特にGC rich なmRNAおよび強固な二次構造をとるmRNAに有効） |
| 増幅サイズ | 少なくとも5 kb程度までは増幅可能 |
| 逆転写酵素 | BcaBEST Polymerase（至適温度 65℃） |
| DNA polymerase | Bca-Optimized Taq |
| 1st strand cDNA合成用プライマー |
Random 9 mers
より選択可能 |
| 操作 | 1本のチューブ内で反応可。熱処理により、逆転写酵素活性を失活させた後、PCR反応を行う。 |
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