TaKaRa RNA PCR™ Kit (AMV) Ver.3.0

本製品は、RNAをcDNAに変換した後にPCRを行う2ステップRT-PCRのためのキットである。AMV（Avian Myeloblastosis Virus）由来の逆転写酵素AMV RTase XLによるRNAからのcDNA合成、およびTaKaRa Ex Taq HS によるcDNAを鋳型としたPCR増幅を一本のチューブ内で行うことができる。本製品には、RNAからのcDNA合成およびcDNAのPCR増幅に必要なすべての試薬が含まれている。AMV RTase XLは、反応温度を高く設定することが可能なため（42～60℃）、長鎖のcDNA合成だけでなく複雑な二次構造を取りやすいRNAの逆転写反応にも有効である。PCR増幅のためのTaKaRa Ex Taq HSは、Hot Start PCR用の酵素であるため、反応液調製時のミスアニーリングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができ、特異性の高いPCR増幅が可能である。Oligo dT-Adaptor Primerは、polyA^＋RNAの3'末端からのcDNA合成をさらに効率良く行えるよう工夫されている。これにより、3'-RACE法による未知の3'末端の増幅を効率良く行うことが可能である。

（100回分）^*1

AMV Reverse Transcriptase XL（5 U/μl）	50 μl
RNase Inhibitor （40 U/μl）	25 μl
Random 9 mers （50 pmol/μl）	50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer （2.5 pmol/μl）	50 μl
RNase Free dH2O	1 ml
TaKaRa Ex Taq HS （5 U/μl）	25 μl
M13 Primer M4 （20μM）	50 μl
10×RT Buffer*2	1 ml
5×PCR Buffer	1 ml
dNTP Mixture （各10 mM）	150 μl
MgCl2 （25 mM）	1 ml
Control F-1 Primer （20 pmol/μl）*3	25 μl
Control R-1 Primer （20 pmol/μl）*4	25 μl
Positive Control RNA （2×105 copies/μl）*5	25 μl

*1　[ 10 μl逆転写反応→50 μl PCR反応 ]の100回分
*2　100 mM Tris-HCl (pH8.3)、500 mM KCl
*3　Positive Control RNA用上流プライマー
*4　Positive Control RNA用下流プライマー
*5　pSPTet3プラスミドの転写polyA^＋ RNA

－20℃

RNAテンプレート	全般
増幅サイズ	少なくとも5 kb程度までは増幅可能
逆転写酵素	AMV Reverse Transcriptase XL（42～60℃で逆転写可能）
DNA Polymerase	TaKaRa Ex Taq HS
RNase Inhibitor	必要（キットに含まれる）
1st strand cDNA合成用プライマー	Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer、特異的下流プライマーより選択可
3'-RACE法	RT時にOligo dT-Adaptor Primer、PCR時にM13 M4 Primerを使用することにより、3'-RACE法に対応
操作	1本のチューブ内で反応可。熱処理により逆転写酵素活性を失活させた後、PCR反応を行う。

TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver. 3.0は、AMV Reverse Transcriptase XLによるRNAからのcDNA合成を行い、続けて同一チューブ内でTaKaRa Ex Taq HSによるPCR増幅を行う。 RNAからcDNA合成を行う際のプライマーとしてRandom 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer、あるいはcDNAの下流部分の配列を有する特異的なプライマー（特異的下流プライマー）を用いることができる。 3'-RACE法を行う際はOligo dT-Adaptor Primerを用いる。