製品説明
本製品は、RNAをcDNAに変換した後にPCRを行う2ステップRT-PCRのためのキットである。AMV(Avian Myeloblastosis Virus)由来の逆転写酵素AMV RTase XLによるRNAからのcDNA合成、およびTaKaRa Ex Taq HS によるcDNAを鋳型としたPCR増幅を一本のチューブ内で行うことができる。本製品には、RNAからのcDNA合成およびcDNAのPCR増幅に必要なすべての試薬が含まれている。AMV RTase XLは、反応温度を高く設定することが可能なため(42~60℃)、長鎖のcDNA合成だけでなく複雑な二次構造を取りやすいRNAの逆転写反応にも有効である。PCR増幅のためのTaKaRa Ex Taq HSは、Hot Start PCR用の酵素であるため、反応液調製時のミスアニーリングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができ、特異性の高いPCR増幅が可能である。Oligo dT-Adaptor Primerは、polyA+RNAの3'末端からのcDNA合成をさらに効率良く行えるよう工夫されている。これにより、3'-RACE法による未知の3'末端の増幅を効率良く行うことが可能である。
内容
(100回分)
*1
AMV Reverse Transcriptase XL(5 U/μl) |
50 μl |
RNase Inhibitor (40 U/μl) |
25 μl |
Random 9 mers (50 pmol/μl) |
50 μl |
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl) |
50 μl |
RNase Free dH2O |
1 ml |
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) |
25 μl |
M13 Primer M4 (20μM) |
50 μl |
10×RT Buffer*2 |
1 ml |
5×PCR Buffer |
1 ml |
dNTP Mixture (各10 mM) |
150 μl |
MgCl2 (25 mM) |
1 ml |
Control F-1 Primer (20 pmol/μl)*3 |
25 μl |
Control R-1 Primer (20 pmol/μl)*4 |
25 μl |
Positive Control RNA (2×105 copies/μl)*5 |
25 μl |
*1 [ 10 μl逆転写反応→50 μl PCR反応 ]の100回分
*2 100 mM Tris-HCl (pH8.3)、500 mM KCl
*3 Positive Control RNA用上流プライマー
*4 Positive Control RNA用下流プライマー
*5 pSPTet3プラスミドの転写polyA
+ RNA
保存
-20℃
特長
RNAテンプレート |
全般 |
増幅サイズ |
少なくとも5 kb程度までは増幅可能 |
逆転写酵素 |
AMV Reverse Transcriptase XL(42~60℃で逆転写可能) |
DNA Polymerase |
TaKaRa Ex Taq HS |
RNase Inhibitor |
必要(キットに含まれる) |
1st strand cDNA合成用プライマー |
Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer、特異的下流プライマーより選択可 |
3'-RACE法 |
RT時にOligo dT-Adaptor Primer、PCR時にM13 M4 Primerを使用することにより、3'-RACE法に対応 |
操作 |
1本のチューブ内で反応可。熱処理により逆転写酵素活性を失活させた後、PCR反応を行う。 |
TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver. 3.0は、AMV Reverse Transcriptase XLによるRNAからのcDNA合成を行い、続けて同一チューブ内で
TaKaRa Ex Taq HSによるPCR増幅を行う。 RNAからcDNA合成を行う際のプライマーとしてRandom 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer、あるいはcDNAの下流部分の配列を有する特異的なプライマー(特異的下流プライマー)を用いることができる。 3'-RACE法を行う際はOligo dT-Adaptor Primerを用いる。