BcaBEST^® RNA PCR Kit Ver. 1.1

本製品は、RNAをcDNAに変換した後にPCRを行う2ステップRT-PCRのためのキットである。BcaBEST PolymeraseはBacillus caldotenax由来のDNA Polymerase活性と逆転写活性を合わせもつ酵素である。この逆転写活性によるRNAからのcDNAを合成、およびLA PCRテクノロジーより生まれたBca-Optimized TaqによるcDNAのPCR増幅を一本のチューブ内で行うことができる。BcaBEST Polymeraseを用いたRT-PCRでは逆転写反応至適温度が65℃と高く、複雑な二次構造を持つRNAからcDNAを合成するのに有効である。

（100回分）^*1

1.	BcaBEST Polymerase （22 U/μl）	50 μl
2.	RNase Inhibitor （40 U/μl）	25 μl
3.	Random 9 mers （50 μM）	50 μl
4.	Oligo dT Primer （50 μM）	50 μl
5.	RNase Free dH2O	1 ml
6.	Bca-Optimized Taq （5 U/μl）	25 μl
7.	2×Bca 1st Buffer	1.25 ml×2
8.	5×Bca 2nd Buffer	800 μl
9.	dNTP Mixture （各10 mM）	50 μl
10.	MgSO4（25 mM）	500 μl
11.	Control F-1 Primer（20 μM）*2	25 μl
12.	Control R-1 Primer（20 μM）*3	25 μl
13.	Positive Control RNA（2×105 copies/μl）*4	25 μl

*1　[10 μl逆転写反応 → 50 μl PCR反応] の100回分
*2　Positive Control RNA用上流プライマー
*3　Positive Control RNA用下流プライマー
*4　pSPTet3 プラスミドの転写 polyA^＋ RNA

－20℃

図1 BcaBEST RNA PCRの原理


図2 RNA PCRのフローチャート
* gradientの操作は、ターゲットによっては必要がない場合がある。

本キットは、BcaBEST PolymeraseによるRNAからのcDNA合成を行い、続けて同一チューブ内でBca-Optimized TaqによるPCR増幅を行う。RNAからcDNA合成を行う際のプライマーとしてRandom 9 mers、Oligo dT Primer、あるいはPCRの際のアンチセンスプライマーに相当するcDNAの下流部分の配列を有する特異的なプライマー（特異的下流PCRアンチセンスプライマー）を用いることができる。

RNAテンプレート	全般（特にGC rich なmRNAおよび強固な二次構造をとるmRNAに有効）
増幅サイズ	少なくとも5 kb程度までは増幅可能
逆転写酵素	BcaBEST Polymerase（至適温度 65℃）
DNA polymerase	Bca-Optimized Taq
1st strand cDNA合成用プライマー	Random 9 mers Oligo dT Primer 特異的下流プライマー（PCR時のアンチセンスプライマー）   　より選択可能
操作	1本のチューブ内で反応可。熱処理により、逆転写酵素活性を失活させた後、PCR反応を行う。