Recombinant Taq DNA Polymerase
反応用バッファー添付＋dNTP
製品説明
本製品は、Thermus aquaticus DNA Polymerase遺伝子をクローニングし改変したものを大腸菌にて大量発現させ、高度に精製した分子量94 kDaの耐熱性DNAポリメラーゼである。天然のTaq DNA Polymeraseと同じ機能を有する。
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内容
（250 U）
| TaKaRa Taq （5 U/μl） | 50 μl |
| 10×PCR Buffer （Mg2+ plus） | 1 ml |
| dNTP Mixture （各2.5 mM） | 800 μl |
| TaKaRa Taq （5 U/μl） | 50 μl |
| 10×PCR Buffer （Mg2+ free） | 1 ml |
| MgCl2 （25 mM） | 1 ml |
| dNTP Mixture （各2.5 mM） | 800 μl |
保存
－20℃
形状
| 20 mM | Tris-HCl （pH8.0） |
| 100 mM | KCl |
| 0.1 mM | EDTA |
| 1 mM | DTT |
| 0.5％ | Tween 20 |
| 0.5％ | NP-40 |
| 50％ | Glycerol |
添付10×PCR Buffer組成
| 10×PCR Buffer (Mg2+ plus) | 100 mM | Tris-HCl （pH8.9） |
| 500 mM | KCl | |
| 15 mM | MgCl2 | |
| 10×PCR Buffer (Mg2+ free) | 100 mM | Tris-HCl （pH8.9） |
| 500 mM | KCl |
添付dNTP Mixture*
| 濃度 | 各2.5 mM |
| 形状 | 水溶液（ナトリウム塩） pH7～9 |
| 純度 | 各98％以上 |
* dATP、dCTP、dGTP、dTTPの等モル混合物で、希釈せずにそのままPCR反応に用いることができる。
起源
Escherichia coli carrying a plasmid that encodes the Thermus aquaticus DNA Polymerase gene
活性の定義
活性化サケ精子DNAを鋳型/プライマーとして用い、下記の活性測定用反応液中にて74℃において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 25 mM | TAPS緩衝液（pH9.3、25℃） |
| 50 mM | KCl |
| 2 mM | MgCl2 |
| 0.1 mM | DTT |
| 各200 μM | dATP・dGTP・dCTP |
| 100 μM | [3H]-dTTP |
| 0.25 mg/ml | 活性化サケ精子DNA |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
PCR検定
λDNAを鋳型としたPCR反応（増幅産物 8 kb）において良好な増幅がみられることを確認している。
用途
- PCR（Polymerase Chain Reaction）法によるDNA増幅
- DNAシーケンシング
PCR産物について
TaKaRa Taq を用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にAが1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-Vector［pMD20（製品コード 3270）、pMD19 (Simple)（製品コード 3271）など］にクローニングすることができる。
また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。
また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。
一般的なPCR反応液組成（Total 50 μl）
| TaKaRa Taq （5 U/μl） | 0.25 μl |
| 10×PCR Buffer* | 5 μl |
| dNTP Mixture （各2.5 mM） | 4 μl |
| Template | ＜500 ng |
| Primer 1 | 0.2～1.0 μM（final conc.） |
| Primer 2 | 0.2～1.0 μM（final conc.） |
| 滅菌精製水 | up to 50 μl |
* Mg2+ freeのPCR Bufferの場合には、最適の濃度になるように添付MgCl2を加える。
PCR条件 （例）
1 kb DNA を増幅する場合
注意） 変性条件は、使用機種とチューブの種類にあわせて設定してください。
設定の目安は、98℃の場合は5 sec～10 sec、94℃の場合は20 sec～30 secです。
| 98℃、10 sec 55℃、30 sec 72℃、1 min |
30 cycles |
注意） 変性条件は、使用機種とチューブの種類にあわせて設定してください。
設定の目安は、98℃の場合は5 sec～10 sec、94℃の場合は20 sec～30 secです。
補足資料
「タカラバイオ PCR Enzymes Guide」では、PCR酵素・関連製品とそのアプリケーションをご紹介しています。
下記よりPDFでご覧いただけます。
冊子のお届けは、こちらからご請求ください。
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Protocols
Application
TaKaRa Taqの品質テストE. coliゲノムのコンタミチェック
TaKaRa Taq、TaKaRa Ex Taq、TaKaRa LA Taqを用いた増幅例
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