2×Premix PCR Solution
製品説明
本製品は、ホットスタートPCR用のDNAポリメラーゼ、反応バッファー、dNTP Mixtureをあらかじめ2倍濃度で混合したものである。TaKaRa Taq HS、TaKaRa Ex Taq HSは、抗Taq抗体とTaKaRa TaqあるいはTaKaRa Ex Taqを混合したホットスタートPCR用の酵素で、高温に加熱するまでは抗Taq抗体が酵素に結合しポリメラーゼ活性を抑えているため、サイクル前のミスプライミングやプライマーダイマ－に由来する非特異的増幅を防ぐことができる。抗Taq抗体は、PCRの最初のDNA変性ステップで変性するため、従来のPCR条件で反応できる。抗Taq抗体を失活させるための特別なステップは必要ない。
保存
－20℃保存（4℃で3ヵ月保存可能）
注）過度な凍結融解の繰り返しは活性が低下する場合があります。使用頻度が高い場合、いったん融解したものは4℃保存をお勧めします。使用前には、転倒混和後スピンダウンしてください。
組成
Premix Taq Hot Start Version （製品コード R028A）
Premix Ex Taq Hot Start Version （製品コード RR030A）
| TaKaRa Taq HS | 1.25 U/25 μl |
| dNTP Mixture | 2×conc. ；各0.4 mM |
| PCR Buffer | 2×conc. ；20 mM Tris-HCl (pH8.9), 100 mM KCl, 3 mM MgCl2 |
Premix Ex Taq Hot Start Version （製品コード RR030A）
| TaKaRa Ex Taq HS | 1.25 U/25 μl |
| dNTP Mixture | 2×conc. ；各0.4 mM |
| Ex Taq Buffer | 2×conc. ；4 mM Mg2+を含む |
用途
Hot Start PCR法によるDNA増幅
PCR産物について
Premix Taq Hot Start Version、Premix Ex Taq Hot Start Versionを用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にAが1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-vector［pMD20（製品コード 3270）、pMD19(simple)（製品コード3271）など］にクローニングすることができる。また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
PCR反応例 (total 50μl PCR)
| Premix Ex Taq Hot Start Version or Premix Taq Hot Start Version* | 25 μl |
| Template | ＜500 ng |
| Primer 1 | 0.2～1.0 μM（final conc.） |
| Primer 2 | 0.2～1.0 μM（final conc.） |
| 滅菌精製水 | up to 50 μl |
PCR条件
PCRの最初のDNA変性ステップで抗Taq抗体は失活するので、従来のPCR条件が使用できる。抗Taq抗体を失活させるための特別なステップは必要ない。
| （例） | 1 kb DNAを増幅する時 | ||||||||
| 98℃ 55℃ 72℃ |
10 sec. 30 sec. 1 min. |
30 cycles | or | 98℃ 68℃ |
10 sec. 1 min. | 30 cycles | |||
| 注） | 変性条件は、サーマルサイクラーの使用機種と反応チューブの種類に合わせて設定する。設定の目安は、94℃ 20～30 sec.、あるいは98℃ 5～10 sec. |
- 注意事項
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