浮遊培養細胞での組換えタンパク質発現に
- 浮遊培養のCHO、293細胞での高収量タンパク質発現に
- 複数のCHO細胞用培地で利用可能
- 少しの条件検討で再現性の高いタンパク質発現を実現
- 動物由来成分フリー
製品説明
TransIT-PRO Transfection Kitは、浮遊培養のCHOと293細胞において高収量のタンパク質発現を行うための、動物由来成分を含まない形質転換キットです。
プラスミドDNAの一過性導入による目的タンパク質発現を最大にすることにより、タンパク質生産の時間が節約できます。本製品は、さまざまな培地組成で利用可能なため、一過性発現、安定発現の両方で同じ培地を利用できます。TransIT-PROはタンパク質生産において、直鎖ポリエチレンイミン (linear PEI )よりも優れています。
図1. 浮遊培養CHO細胞での高タイター抗体生産
TransIT-PRO：PRO Boost Reagent：DNA（1：1：1）、25 kDa linear PEI：DNA（6：1）、L社同等品：DNA（1：1）の条件で、一過性に遺伝子導入したヒトIgG1をCHO細胞で産生させた。使用プラスミドDNA量は、1 ml培養液につき1 μgを使用し、0.5×106細胞/mlで形質転換を行った。
パネルA：3、5、7日後に培養上清をhuman IgG-Fc sandwich ELISAを使用して測定した。パネルB：7日後の上清をウェスタンブロット法により解析した。S1、S2、S3はそれぞれ1.6 mg/L、3.2 mg/L、6.3 mg/LのIgGスタンダードである。
プラスミドDNAの一過性導入による目的タンパク質発現を最大にすることにより、タンパク質生産の時間が節約できます。本製品は、さまざまな培地組成で利用可能なため、一過性発現、安定発現の両方で同じ培地を利用できます。TransIT-PROはタンパク質生産において、直鎖ポリエチレンイミン (linear PEI )よりも優れています。
図1. 浮遊培養CHO細胞での高タイター抗体生産
TransIT-PRO：PRO Boost Reagent：DNA（1：1：1）、25 kDa linear PEI：DNA（6：1）、L社同等品：DNA（1：1）の条件で、一過性に遺伝子導入したヒトIgG1をCHO細胞で産生させた。使用プラスミドDNA量は、1 ml培養液につき1 μgを使用し、0.5×106細胞/mlで形質転換を行った。
パネルA：3、5、7日後に培養上清をhuman IgG-Fc sandwich ELISAを使用して測定した。パネルB：7日後の上清をウェスタンブロット法により解析した。S1、S2、S3はそれぞれ1.6 mg/L、3.2 mg/L、6.3 mg/LのIgGスタンダードである。
図2. さまざまな培地で高収量なタンパク質産生が可能
CHO細胞を図1と同様の方法により、24ウェルプレートで遺伝子導入させた。
パネルA：48時間後のルシフェラーゼ活性測定
パネルB：5日後のヒトIgG1量（human anti-Fc sandwich ELISA法による）
使用培地：BD Select CD1000 medium（Becton, Dickinson社）、BD Select CHO medium（Becton, Dickinson社）、FreeStyle CHO Expression medium（Life Technologies）、ProCHO 5 medium（Lonza社）、PowerCHO 2 CD medium（Lonza社）
図3. 浮遊培養293細胞での高収率タンパク質産生
TransIT-PRO（試薬：DNA ＝1.5：1）または、L社同等品（試薬：DNA＝2：1）を用い、FreeStyle 293‐F cells（Life Technologies）に一過性で10種類の分泌タンパク質（抗体を含まない）を発現させた。培養にはFreeStyle 293 Expression Mediumを用い、トランスフェクションは細胞密度1×106 cells/mlで実施した。タンパク質発現培養は1～6Lスケールで行った。（ユーザー様提供データ）
実験の詳細はこちらをご確認ください。
図4. 一過性遺伝子導入のスケールに関係なくタンパク質を高産生
CHO-S細胞にヒトIgG1遺伝子をコードしたプラスミドを一過性に遺伝子導入した。
TransIT-PRO：PRO Boost Reagent：DNA＝1：0.5：1の比率で、0.5×106細胞/mlの細胞濃度で導入された。使用培地は、BD Select CD1000 培地を使用した。4 ml培養は、24-well deep well shake block、40 mlは125 ml Erlenmeyer 撹拌フラスコ、40 mlは125 ml 2枝付スピナーフラスコ、400 mlは500 ml 2枝付スピナーフラスコで行った。
内容
TransIT-PRO Transfection Kit（製品コード MIR5700）
| TransIT-PRO Reagent | 1.0 ml |
| PRO Boost Reagent | 1.5 ml |
用途
浮遊培養のCHO、293細胞でのタンパク質生産のための遺伝子導入
保存
－20℃
トランスフェクション試薬選択 オンラインツール
◆選択ガイド
実験目的別に、各標的細胞に最適な遺伝子導入試薬（Mirus社製品）をまとめました。
効率的な試薬の選択にご活用ください。
効率的な試薬の選択にご活用ください。
▶ 遺伝子導入試薬 選択ガイド（Mirus社）
◆検索ツール
“Reagent Agent”は、Mirus社が提供するトランスフェクション試薬の検索ツールです。
細胞と導入する核酸の種類から、推奨されるトランスフェクション試薬を検索することができます。
細胞と導入する核酸の種類から、推奨されるトランスフェクション試薬を検索することができます。
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- 注意事項
- 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
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