TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set

rRNAの塩基配列は、マイコプラズマを含め原核生物の間で非常によく保存されている。これに対してrRNAオペロン上のrRNAをコードするDNA間のスペーサー領域、例えば16Sと23S間の領域の長さおよび配列は、生物種によって大きく異なっている。このスペーサー領域は、マイコプラズマのそれぞれの種間でもかなり異なる部分もあるがよく保存されている配列も存在する^1）,2）。
本セットでは、このスペーサー領域を、16Sと23SのrRNAをコードするDNA上の2つのプライマーF1とR1を用いて増幅した後、この保存配列に基づいてデザインされたプライマー（図1のF2）と23S DNA上のプライマーR2を用いてNested PCRで増幅する。この系を用いればPCR反応系に混入してくる培養細胞等の他の生物種由来のDNAに影響されずにマイコプラズマのDNAのみを特異的に増幅することができるので、単にマイコプラズマ検出の感度だけでなく検出の特異性を上げることができる。表1に本セットの中に含まれている4つのプライマー配列と、これに対応する12種のマイコプラズマの16S-Spacer-23S領域中の配列を示す。


図1. PCR法によるマイコプラズマの検出原理


表1. プライマー配列と、それに対応するマイコプラズマDNA上の配列（● はプライマー配列と同じであることを示す）

TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Setは、細胞培養等のバイオ材料に夾雑するマイコプラズマをPCR法を用いて検出するためのPrimer Setである。本セットを用いれば、従来の培養法では1週間を要したマイコプラズマ検出を、PCRによる増幅と電気泳動による増幅バンドの検出という数時間の操作で行なうことができ、簡便に判定結果を得ることができる。本セットでは培養細胞によく見い出されるものをはじめとして、少なくともマイコプラズマ属中の11種 (M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. salivarium, M. hominis, M. pulmonis, M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyopneumoniae, M. capricolum) およびウレアプラズマ属中の1種 (U. urealyticum) を感度よく検出することができる。
なお、本セットは、別売のTaKaRa Taq (製品コード R001A/B/C) またはTaKaRa Ex Taq (製品コード RR001A/B/C) との使用により最高の効率が得られるように設計されている。

（100回分、50 μl反応）

1. MCGp F1 Primer（20 pmol/μl）	50 μl
2. MCGp R1 Primer（20 pmol/μl）	50 μl
3. MCGp F2 Primer（20 pmol/μl）	50 μl
4. MCGp R2 Primer（20 pmol/μl）	50 μl
5. Control Template（1 ng/μl）	50 μl

－20℃

サンプルの培地中に阻害物質が含まれているかどうかを確認するためには、使用するサンプルにControl Template（0.5 μl）を加えたものをTemplate にして Control 実験を行う。バンドが確認できない場合は、サンプルよりDNAを抽出し、これを反応系に加えて増幅を行う。
Control Templateを用いた場合には、F1とR1のプライマーで810 bp、F2とR2のプライマーで590 bpのDNA断片が増幅する。

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