Retrovirus Titer Set (for Real Time PCR)

本製品は、リアルタイムRT-PCRを利用してMLV（murine leukemia virus：マウス白血病ウイルス）ベースのレトロウイルスベクターのRNAゲノム量を測定し、力価（RNAタイター）を決定するためのセット製品である。
本セットをOne Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（製品コード RR066A）、One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time)（製品コード RR086A）と一緒に使用することで、ウイルス上清から直接RNAタイターを測定することができ、サンプリングから約4時間で結果が得られる。また、MLVのパッケージグシグナル部分を増幅ターゲットにしているので、ほぼすべてのMLVベースのレトロウイルスベクターのRNAタイターを測定することが可能である。
レトロウイルスベクターの感染力価を測定する場合、指標細胞にレトロウイルスベクターを感染させ、蛍光や薬剤耐性などを利用して感染効率を測定し力価（生物学的タイター）を算出する方法が通常用いられる。この方法には少なくとも数日を要し、またマーカー遺伝子や薬剤耐性遺伝子が搭載されていないレトロウイルスベクターの場合は測定することができない。さらに、生物学的タイターを指標にMOI（multiplicity of infection）を決めて細胞に感染させる場合には、力価測定に数日以上かかるため一旦ウイルス上清を凍結して感染まで保存する必要があり、凍結融解によるウイルス力価の低下を招き、意図するものとは異なるMOIで感染してしまう場合がある。
本セットはレトロウイルスベクターのRNAゲノム量を測定するので、マーカー遺伝子や薬剤耐性遺伝子とは関係なくタイター測定することができる。また、約4時間で測定結果が得られるので、ウイルス上清を凍結することなく目的のMOIで感染させることが可能となる。
併用するOne Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time）は、インターカレーター法による1ステップリアルタイムRT-PCR専用のキットである。伸長性に優れ短時間の反応で効率よくcDNA合成が可能な逆転写酵素PrimeScriptと、PCR酵素として定評のあるTaKaRa Ex Taq HSを用い、反応系を1ステップRT-PCR用に至適化しており、安定した1ステップリアルタイムRT-PCRを行える。

（100反応分；25μl反応系^*1）

Forward Titer Primer FRT-1（10 pmol/μl）	50 μl
Reverse Titer Primer RRT-1（10 pmol/μl）	50 μl
RNA Control Template（5×108 copies/μl）	10 μl
EASY Dilution (for Real Time PCR)	1 ml×2
DNase I (RNase Free)（5 U/μl）	40 μl
10× DNase I Buffer	50 μl
RNase Inhibitor（40 U/μl）	10 μl

*1 リアルタイムRT-PCR100反応およびDNase I処理20反応用

－20℃
RNA Control Templateは凍結融解の繰り返しによる分解を防ぐため、少量ずつ分注後保存することをお勧めします。Deep freezerにて－70～－80℃で保存してください。

One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（製品コード RR066A）、またはOne Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time) (製品コード RR086A)