CRISPR/Cas9 プラスミド システム

プラスミドDNA用いるゲノム編集システム
  • 1つのベクターでsgRNA、Cas9ヌクレアーゼ、蛍光タンパク質を同時に発現
  • 準備するのはsgRNA発現用オリゴDNAだけ
  • 線状化ベクターと高効率なLigation Mix、コンピテントセルが含まれており、sgRNA配列を迅速、確実にクローニング
  • 輝度の高い蛍光マーカー(ZsGreen1、tdTomato)の利用により、導入効率のモニタリングやFACSによる細胞の濃縮、単離が可能

  •  ゲノム編集ガイド 
   
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
632601

CLN

Clontech
Guide-it™ CRISPR/Cas9 System (Green)
導入システム編 労働安全衛生法 安全データシート(SDS)添付 ライセンス
1 Kit ¥73,000
¥58,400
2020/05/25~
2020/09/30

説明書・データシート・ベクター情報
Z2601N
632602

CLN

Clontech
Guide-it™ CRISPR/Cas9 System (Red)
導入システム編 労働安全衛生法 安全データシート(SDS)添付 ライセンス
1 Kit ¥73,000
¥58,400
2020/05/25~
2020/09/30

説明書・データシート・ベクター情報
Z2602N
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製品説明

Guide-it CRISPR/Cas9 Systemは、CRISPR/Cas9ゲノム編集に使用するsingle guide RNA (sgRNA)配列をプラスミドベクターにクローニングし、哺乳類細胞で発現させるためのキットである。本製品に含まれるpGuide-itプラスミドベクターには、Cas9ヌクレアーゼ、蛍光タンパク質(ZsGreen1、またはtdTomato)が搭載されており、クローニングしたsgRNAと同時に、Cas9ヌクレアーゼ、蛍光タンパク質を発現させることができる。蛍光マーカーとして、輝度の高いZsGreen1、tdTomatoを利用しているため、トランスフェクション効率のモニタリングやフローサイトメトリーによる導入細胞の濃縮、単離に用いることができる。sgRNA発現プラスミドの構築は非常にシンプルで、準備するのはターゲット配列に対応して設計した1組のオリゴDNAだけである。製品には線状化済みのベクター、高効率のLigation mix、高効率のStellar Competent Cellが含まれており、準備したオリゴDNAをアニーリング後、簡単に効率良くベクターにライゲーションし、形質転換することができる。
本製品には、10回のsgRNA発現プラスミド構築に必要な試薬が全て含まれている。
pGuide-itプラスミドベクターの構造
図1 pGuide-itプラスミドベクターの構造

pGuide-it-ZsGreen1 plasmidを用いたゲノム編集
図2 pGuide-it-ZsGreen1 plasmidを用いたゲノム編集
12-wellプレートにHEK293細胞、HeLa細胞、U2OS細胞、HT1080細胞、各1×105 cellsを播種し16時間培養した後、Xfect Transfection Reagentを用いてpGuide-it-ZsGreen1 plasmidのトランスフェクションを行った。pGuide-it-ZsGreen1 plasmidは、CCR5、C4BPB、EMX1を標的遺伝子とするsgRNAをそれぞれpGuide-it-ZsGreen1 Vectorにクローニングして作製し、各2.5 μgを用いた。トランスフェクションから48時間後、ZsGreen1の蛍光を蛍光顕微鏡で確認し(A)、FACSでトランスフェクション効率を測定した(B, Transfection efficiency)。ゲノムDNAへの変異導入効率は、PCRベースの変異検出キットであるGuide-it Mutation Detection Kit(製品コード 631443)を用いて調べた(B)。ターゲット配列を含む領域を細胞から直接PCR増幅し、増幅産物を変性、再アニーリングさせてミスマッチを含む二本鎖DNAを作製し、Guide-it Resolvaseでミスマッチ部分を切断した。その後、アガロースゲル電気泳動を行い、デンシトメーターで変異導入の割合を調べた(B, Indel)。

内容

  • pGuide-it-ZsGreen1 Vector (Linear)(製品コード 632601)
    またはpGuide-it-tdTomato Vector (Linear)(製品コード 632602)
  • Guide-it Ligation Components
    DNA Ligation Mighty Mix
    Guide-it Oligo Annealing Buffer
    Guide-it Control Annealed Oligos (100 fmol/μl)
    Guide-it Sequencing Primer 1 (100 pmol/μl)
    PCR Grade Water
  • Stellar Competent Cells(製品コード 636763)

保存

Stellar Competent Cells :-70℃
その他:-20℃
注意事項
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