Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots

SARS-CoV-2スパイクタンパク質エンベロープを持つシュードタイプレンチウイルスの作製に
  • 高タイターのSARS-CoV-2シュードウイルス溶液の作製が可能
  • レンチウイルスベクタープラスミド溶液を加え、293T細胞に添加するだけの簡便プロトコール
  • トランスフェクション試薬が不要
  • コートするスパイクタンパク質エンベロープは、野生型、変異型(それぞれ全長もしくはTruncated)から選択
  • 各Packaging Mixのみの単品購入も可能
* Lenti-X Reporter Vector Set(pLVXS-ZsGreen1 / Luciferase-Puro Vector)につきまして、不足分は大腸菌で増やしてお使いください。
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
632668

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length)
ライセンス
12回 ¥170,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2668N
632669

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length)
ライセンス
12回 ¥170,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2669N
631292

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length)
NEW ライセンス
12回 ¥170,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z1292N
632670

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)
ライセンス
12回 ¥170,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2670N
632671

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)
ライセンス
12回 ¥170,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2671N
631293

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated)
NEW ライセンス
12回 ¥170,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z1293N
632672

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length)
ライセンス
12回 ¥138,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2672N
632673

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length)
ライセンス
12回 ¥138,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2673N
631290

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length)
NEW ライセンス
12回 ¥138,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z1290N
632674

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated)
ライセンス
12回 ¥138,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2674N
632675

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated)
ライセンス
12回 ¥138,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2675N
631291

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated)
NEW ライセンス
12回 ¥138,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z1291N
632676

CLN

Clontech
Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control)
ライセンス
6回 ¥69,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2676N
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製品説明

SARS-CoV-2の宿主細胞への感染メカニズムの研究には、しばしばSARS-CoV-2スパイクタンパク質でシュードタイピングされた代替ウイルスが使用される。
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shotsは、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質エンベロープを持つシュードタイプレンチウイルスを簡便に作製するためのパッケージングシステムである。
トランスフェクション試薬Xfect Transfection Reagentと、SARS-CoV-2スパイクタンパク質を発現するパッケージングプラスミドが1本のチューブ内にプレミックスされている。レンチウイルスベクタープラスミド溶液を添加して静置後、10 cmディッシュ中のLenti-X 293T Cell Line(製品コード 632180)に添加するだけで、高タイターのSARS-CoV-2シュードウイルスを作製することができる。
シュードウイルスの宿主細胞への遺伝子導入効率は、ベクタープラスミドに組み込まれているレポーター(ZsGreen1もしくはルシフェラーゼ)で検証可能である。
宿主細胞にはHuman ACE2 293T Cell Line(製品コード 631289)などが利用できる。

シュードウイルスにコートさせるSARS-CoV-2スパイクタンパク質は、以下の6種類から選択可能である。
  • 野生型(全長):WT Spike, Full Length
    SARS-CoV-2の武漢-Hu-1分離株(NC_045512.2)由来。哺乳類細胞での発現のためにコドンを最適化している。
  • D614G変異型(全長):D614G Spike, Full Length
    この変異型スパイクタンパク質を持つウイルスは、世界中に急速に広まっている。(Isabel et al.2020)
  • B.1.351変異型(全長):B.1.351 Spike, Full Length
    南アフリカで最初に特定された変異型。WHOではβ型とされている。
  • 野生型(Truncated):WT Spike, Truncated
  • D614G変異型(Truncated):D614G Spike, Truncated
  • B.1.351変異型(Truncated):B.1.351 Spike, Truncated
    それぞれの全長配列に対してC末端の19アミノ酸を欠失させた変異体。
    エンベロープ上のスパイクタンパク質の増加、さらにウイルスの感染力上昇に関連していることが報告されている。(Johnson et al.2020)

(注)
  1. 本システムでパッケージングを行う際は、必ずテトラサイクリン様活性を有しないTet System Approved FBSを含んだ培地で細胞培養してください。
  2. 本システムに細胞は含まれておりません。パッケージングには、別途、Lenti-X 293T Cell Line(製品コード 632180)をお求めください。
  3. 研究開発等に係る遺伝子組換え生物等に関する文部科学省・環境省令および各施設の遺伝子組換え実験に関する規則に従ってご使用ください。
  4. 特定の実験の場合は、シュードウイルスを濃縮する必要があります。実験に必要な濃縮倍率はシュードウイルスの種類によって異なります。詳しくは表1をご覧ください。
表1. 標的細胞の少なくとも50%を形質転換させるために必要なシュードウイルスの濃縮倍率(ZsGreen1をレポーターとして用いる場合)
標的細胞の少なくとも50%を形質転換させるために必要なシュードウイルスの濃縮倍率

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shotsのワークフロー
図1.Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shotsのワークフロー

SARS-CoV-2シュードウイルスによるヒトACE2陽性細胞株への遺伝子導入
図2.SARS-CoV-2シュードウイルスによるヒトACE2陽性細胞株への遺伝子導入
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)およびLenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)を使用し、プロトコールに従いSARS-CoV-2シュードウイルスを産生した。
A:ZsGreen1を発現するSARS-CoV-2シュードウイルス100 μlを用いて、48-well plate内、6 μg/mlポリブレン存在下でヒトACE2陽性HEK293T細胞株への遺伝子導入を行った。遺伝子導入6日後に、フローサイトメトリーによって導入効率を測定した。
B:ホタルルシフェラーゼを発現するSARS-CoV-2シュードウイルスを用いて、ACE2陽性HEK293T細胞株、および6 μg/mlポリブレン存在下でACE2陰性HEK293T細胞株(ルシフェラーゼ活性のバックグラウンド確認のため)への遺伝子導入を行った。遺伝子導入6日後に、ルシフェラーゼ活性を測定した。

SARS-CoV-2シュードウイルスの機能性タイター
図3.SARS-CoV-2シュードウイルスの機能性タイター
A:図2AのZsGreen1発現のフローサイトメトリー解析から得られたSARS-CoV-2シュードウイルスの機能性タイター
B:感染72時間後のACE2陽性HEK293T細胞の顕微鏡画像

SARS-CoV-2シュードウイルスに対するACE2-Fc融合タンパク質の中和活性
図4.SARS-CoV-2シュードウイルスに対するACE2-Fc融合タンパク質の中和活性
ACE2とIgGのFc部分を融合させたACE2-Fc融合タンパク質の段階希釈液を、SARS-CoV-2シュードウイルスとともに6 μg/mlポリブレン存在下でACE2陽性HEK293T細胞に添加した。
ACE2-Fc融合タンパク質はシュードウイルスのSARS-CoV-2スパイクタンパク質に結合することで、細胞へのウイルス感染を阻止する。
ウイルス感染の指標として、感染72時間後にルシフェラーゼ活性を測定した。
シュードウイルスのみを添加したコントロールに対する中和率としてグラフ化している(値は3回の試験の平均±SDで記載)。

D614G変異型およびB.1.351変異型シュードウイルスによるACE2陽性細胞株への遺伝子導入
図5.D614G変異型およびB.1.351変異型シュードウイルスによるACE2陽性細胞株への遺伝子導入
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots(D614G Spike, Full LengthまたはTruncated) およびLenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full LengthまたはTruncated)を使用し、プロトコールに従いZsGreen1を発現するSARS-CoV-2シュードウイルスを産生した。Lenti-X Concentrator(製品コード 631231)の標準プロトコールを用いて濃縮した各ウイルス粒子を用いて、48-well plate内、 6 μg/mlポリブレン存在下でヒトACE2陽性HEK293T細胞株への遺伝子導入を行った。
各ウイルス粒子の濃縮倍率および使用量
 B.1.351 Full length:50倍濃縮/50 μl、100 μl
 D614G Full length:20倍濃縮/50 μl、100 μl
 B.1.351 Truncated:20倍濃縮/10 μl、20 μl、30 μl
 D614G Truncated:20倍濃縮/10 μl、20 μl、30 μl

A : 遺伝子導入6日後に、フローサイトメトリーにより測定した導入効率
B : フローサイトメトリー解析から得られたSARS-CoV-2シュードウイルスの機能性タイター

B.1.351変異型シュードウイルスによるHEK293T細胞へのホタルルシフェラーゼ遺伝子導入
図6.B.1.351変異型シュードウイルスによるHEK293T細胞へのホタルルシフェラーゼ遺伝子導入
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full LengthまたはTruncated)を使用し、プロトコールに従いホタルルシフェラーゼを発現するSARS-CoV-2シュードウイルスを産生した。Lenti-X Concentrator(製品コード 631231)の標準プロトコールを用いて20倍に濃縮したウイルス粒子(Full Lengthは100 μl、Truncatedは10~30 μl)を使用して 48-well plate内、 6 μg/mlポリブレン存在下でヒトACE2陽性HEK293T細胞株、およびACE2陰性HEK293T細胞株(ルシフェラーゼ活性のバックグラウンド確認のため)への遺伝子導入を行った。遺伝子導入3日後に、ルシフェラーゼ活性を測定した。

内容

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length)(製品コード 632668)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) (製品コード 632672)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (製品コード 632676)
Lenti-X Reporter Vector Set

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length)(製品コード 632669)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) (製品コード 632673)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (製品コード 632676)
Lenti-X Reporter Vector Set

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length)(製品コード 631292)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (製品コード 631290)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (製品コード 632676)
Lenti-X Reporter Vector Set

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)(製品コード 632670)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) (製品コード 632674)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (製品コード 632676)
Lenti-X Reporter Vector Set

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)(製品コード 632671)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) (製品コード 632675)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (製品コード 632676)
Lenti-X Reporter Vector Set

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated)(製品コード 631293)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (製品コード 631291)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (製品コード 632676)
Lenti-X Reporter Vector Set

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) (製品コード 632672)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) (製品コード 632673)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (製品コード 631290)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) (製品コード 632674)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) (製品コード 632675)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (製品コード 631291)
各12チューブ(凍結乾燥品)
※1チューブで10 cmディッシュ1枚のパッケージングに使用可能

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (製品コード 632676)
6チューブ(凍結乾燥品)
※1チューブで10 cmディッシュ1枚のパッケージングに使用可能

Lenti-X Reporter Vector Set
pLVXS-ZsGreen1-Puro Vector(500 ng/μl) 20 μl
pLVXS-Luciferase-Puro Vector(500 ng/μl) 20 μl
* 本セット単独での販売はありません。
* 不足分は大腸菌で増やしてお使いください。

保存

-20℃
(各 Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mixは乾燥剤が入った付属のホイルポーチ内で保管)

本製品以外に必要な試薬等

  • Lenti-X 293T Cell Line(製品コード 632180)
  • Lenti-X GoStix Plus(製品コード 631280/631281)
  • Human ACE2 293T Cell Line(製品コード 631289)
注意事項
  • 本ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
  • タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
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