長鎖RNAやGCリッチなRNAからの正確性の高いRT-PCRに

PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit

メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR R023A R023A PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit
50回 ¥50,000
説明書・データシート・ベクター情報
TKR R023B(A×4) R023B(A×4) PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit
200回 ¥168,000
説明書・データシート・ベクター情報

逆転写酵素PrimeScriptシリーズのご紹介
PrimeScript IIの高性能をご紹介

製品説明

本製品は、長鎖RNAやGCリッチな領域を含むRNAからも正確性の高いcDNA合成が可能な2ステップRT-PCR用のキットである。
逆転写には、アクセサリータンパク質を用いてPrimeScript RTaseに改良を加え、完全長cDNA合成により威力を発揮するPrimeScript II RTaseを用いている。またPCRには、長鎖やGCリッチなcDNAの増幅に優れたHigh Fidelity PCR酵素PrimeSTAR GXL DNA PolymeraseをRT-PCR用に改良して用いている。
PrimeScript II RTaseはミスプライミングに起因する非特異的伸長が極限まで抑えられているため、高濃度のOligo dT primerを用いて逆転写反応を行ってもcDNAの合成阻害が起こらない。従って高濃度のRNAを鋳型に使用しても効率良い逆転写反応を行うことができる。また、PrimeSTAR GXL DNA Polymeraseは、従来のHigh Fidelity PCR酵素が反応阻害を受ける高濃度の核酸存在下においてもその能力を発揮するため、より広い範囲の鋳型RNA量からcDNA増幅産物を得ることができる。
本キットでは、PrimeScript II RTaseとRNase Inhibitorをプレミックス化したPrimeScript II RT Enzyme Mixを使用している。
本キットは、次のような特長を示す。
  • 長鎖RNAやGCリッチな領域を含むRNAから読み間違えの少ないcDNA増幅産物が得られる。
  • 逆転写反応において、高次構造を取り得るRNA を鋳型にした場合も42℃で優れた伸長性を示す。
  • 反応に使用できるtotal RNA量の許容範囲が非常に広く、使いやすい。
また、プロトコールの一部を変更することで、1ステップRT-PCRにも利用可能である。(1ステップRT-PCRの操作)参照 )

※ 使用するRNAサンプルが長鎖RNAやGCリッチな領域を含むRNAではなく、さらに高い正確性を必要とするRT-PCRには、PCRにPrimeSTAR Max DNA Polymeraseを用いるPrimeScript High Fidelity RT-PCR Kit(製品コード R022A)をご使用ください。

内容

(50回用)*1
1.PrimeScript II RT Enzyme Mix50 μl
2.5×PrimeScript II Buffer200 μl
3.dNTP Mixture(10 mM each)100 μl
4.Oligo dT Primer(50 μM)50 μl
5.Random 6 mers(20 μM)50 μl
6.PrimeSTAR GXL for RT-PCR100 μl
7.5×PrimeSTAR GXL Buffer500 μl
8.Control F-1 primer*2(20 μM)10 μl
9.Control R-1 primer*3(20 μM)10 μl
10.Positive Control RNA(2×105 copies/μl)20 μl
11.RNase Free dH2O1 ml

*1 [ 逆転写反応系20 μl → PCR 反応系50 μl ]の場合の50回分
*2 Positive Control RNA用上流センスプライマー
*3 Positive Control RNA用下流アンチセンスプライマー

保存

-20℃

特長

2ステップRT-PCR(標準プロトコール)の場合
RNAテンプレート全般
増幅サイズ13.5 kbの良好な増幅を確認
逆転写酵素PrimeScript II RTase(至適温度42℃)
DNA PolymerasePrimeSTAR GXL for RT-PCR
RNase Inhibitor必要(PrimeScript II RT Enzyme Mixに含まれる)
1st strand cDNA
合成用プライマー
Random 6 mers
Oligo dT Primer
特異的下流プライマーより選択可


1ステップRT-PCR(オプションプロトコール)の場合
RNAテンプレート全般
増幅サイズ6 kbの増幅を確認
逆転写酵素PrimeScript II RTase(45℃で使用)
DNA PolymerasePrimeSTAR GXL for RT-PCR
RNase Inhibitor必要(PrimeScript II RT Enzyme Mixに含まれる)
1st strand cDNA
合成用プライマー
特異的下流プライマー(PCR時のアンチセンスプライマー)を使用
注:Randomプライマーや Oligo dTプライマーの使用は不可
操作1本のチューブ内で連続的にRT-PCRを行う

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