3'-RACE、クローニングに最適

3'-Full RACE Core Set

メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR 6121 6121 3'-Full RACE Core Set
  • バルクなど特別対応可能
20回 ¥42,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

本製品は3’-RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)法によって、mRNAの3’末端を含む領域を特異的に増幅するためのCore Setである。Oligo dT-3sites Adaptor Primerは、効率良くcDNAを合成できるよう工夫している。また、3sites Adaptor PrimerにはBamH I、Kpn I、Xba Iの制限酵素部位があり、クローニングを容易に行うことができる。この際には上流の特異的プライマーの5’側にも以下の配列を付加しておくと便利である。

図1.3sites Adaptor Primerの配列および制限酵素サイト

内容

(20回分)
1. AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl)*1 20 μl
2. RNase Inhibitor (40 U/μl) 10 μl
3. Oligo dT-3sites Adaptor Primer (2.5 μM) 20 μl
4. RNase Free dH2O 500 μl
5. 3sites Adaptor Primer (20 μM) 20 μl
6. 10×RNA PCR Buffer*2 40 μl
7. dNTP Mixture (各10 mM) 40 μl
8. MgCl2 (25 mM) 80 μl
9. Control F-1-3sites Adaptor Primer (20 μM)*3 10 μl
10. Positive Control RNA (2×105 copies/μl)*4 10 μl

*1 Life Sciences Advanced Technologies社で製造されたものです。
*2 100 mM Tris-HCl (pH8.3)、500 mM KCl
*3 Positive Control RNA用上流プライマー
*4 pSPTet3 プラスミドの転写 polyA+ RNA

保存

-20℃

各プライマーの配列

Oligo dT-3sites Adaptor Primer TaKaRa独自の設計によるdT領域と3sites Adaptor Primer配列を含む
3sites Adaptor primer 5’-CTGATCTAGAGGTACCGGATCC-3’
Control F-1-3sites Adaptor Primer 5’-CTGATCTAGAGGTACCGGATCCATATCGCCGACATCACCGATG-3’

Positive Control RNA

本製品に添付されているControl RNAは、SP6 Promoter領域下流にpBR322由来のテトラサイクリン耐性遺伝子を含む約1 kbの断片を挿入したプラスミドpSPTet3を鋳型として、SP6 RNA Polymerase を用いてin vitro transcriptionにより合成を行ったものである。
このControl RNAは、30個のアデニン塩基によるpolyA tailを持つ鎖長約1.4 kbのpolyA mRNAで、このRNAを鋳型に二本鎖cDNAを合成して、適当なプラスミドに挿入した際、この二本鎖cDNAが完全長のものであれば、このプラスミドはテトラサイクリン耐性になる。

図1 Positive Control RNA:各プライマーを用いた際の増幅断片

3'-RACE法を行うために本セット以外に必要な試薬

  • 既知領域特異的上流プライマー
  • TaKaRa Taq(製品コード R001A/B/C)もしくはTaKaRa Ex Taq(製品コード RR001A/B/C)もしくはTaKaRa LA Taq(製品コード RR002A/B)


(1) Oligo dT-3sites Adaptor Primerを用いて逆転写反応を行い、目的とするmRNA由来の1st strand cDNAを合成する。
(2) Xba I、Kpn I、BamHI Site 含有既知配列特異的上流プライマーと3sites Adaptor PrimerでPCRを行う。
(3) PCR産物を適当な制限酵素(Xba I、Kpn I または BamH I)で切断する。
(4) 適当なベクターにクローニングし、シーケンス解析を行う。

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