ヒトTCRα/β V(D)J可変領域の完全長シーケンスが可能

SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit

  • イルミナ社次世代シーケンサー(MiSeq推奨)用ライブラリー作製キット
  • TCR mRNAの完全長V(D)J可変領域のシーケンスが可能
  • TCRα鎖、TCRβ鎖を同時または個別にライブラリー作製可能
  • 末梢血由来total RNA 10 ng~3 μgまたはT細胞 50~10,000個からライブラリー作製が可能
  • マルチプレックスPCRに依らない増幅でバイアスを低減
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メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
CLN 635014 Z5014N SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit
  • RNAシーケンス解析
  • 化学物質排出把握管理促進法(PRTR法)
  • 安全データシート(SDS)添付
  • ライセンス
12回 ¥180,000
¥144,000
2017/11/27~
2018/02/28

説明書・データシート・ベクター情報
CLN 635015 Z5015N SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit
  • 化学物質排出把握管理促進法(PRTR法)
  • 安全データシート(SDS)添付
  • ライセンス
48回 ¥580,000
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 635016 Z5016N SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit
  • 化学物質排出把握管理促進法(PRTR法)
  • 安全データシート(SDS)添付
  • ライセンス
96回 ¥920,000
説明書・データシート・ベクター情報

※色文字での表示は、キャンペーン価格およびそのキャンペーン期間です。

製品説明

SMARTer Human TCR a/b Profiling Kitは、イルミナ社次世代シーケンサーを用いたヒトT細胞受容体(TCR)のレパトア解析用ライブラリー作製キットである。ヒト末梢血由来total RNA(10 ng~3 μg )、あるいはインタクトなリンパ球(精製済みT細胞 50~10,000個)から直接ライブラリーが作製でき、5’RACE法の応用によってTCR mRNAの完全長V(D)J 可変領域の配列を得ることができる。TCRα鎖とTCRβ鎖のレパトアデータの取得を同一ライブラリーで、あるいは個別にライブラリーを作製して実施することが可能である。
マルチプレックスPCRによる方法とは異なり、本キットではTCRα鎖、β鎖、それぞれに対して単一のプライマーを用いた2段階のPCRでライブラリー増幅を行っている。
また、本製品はSMARTテクノロジー(Switching Mechanism at 5’End of RNA Template)とLNAテクノロジーを利用しており、高感度でバイアスの少ないレパトア解析が可能となっている。
作製されたライブラリーにはインデックスが付加されており、そのままイルミナ社次世代シーケンサーに用いてレパトア解析ができる。

図1. SMARTer Human TCR a/b Profiling Kitを用いたライブラリー作製の概要

内容

SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit Components
Package 1
・Control RNA (1 μg/μl)
Package 2
・SMART-Seq v4 Oligonucleotide (48 μM)
・TCR dT Primer (12 μM)
・5X Ultra Low First-Strand Buffer
・SMARTScribe Reverse Transcriptase (100 U/μl)
・Nuclease-Free Water
・RNase Inhibitor (40 U/μl)
・10X Lysis Buffer
・Elution Buffer (10 mM Tris-Cl, pH 8.5)
・TCRa Human Primer 1 (12 μM)
・TCRb Human Primer 1 (12 μM)
・SMART Primer 1 (12 μM)
SeqAmp DNA Polymerase(製品コード 638504、または638509)
・SeqAmp DNA Polymerase
・SeqAmp PCR Buffer (2X)

TCR a/b Human Indexing Primer Set HT for Illumina
TCR a/b Human Indexing Primer Set HT for Illumina-12
・TCRa Human Primer 2 Reverse HT Index 1 (aR1; 12.5 μM)
・TCRb Human Primer 2 Reverse HT Index 1 (bR1; 12.5 μM)
・TCR Primer 2 Forward HT Index 1~12 (F1~F12; 12.5 μM)
・・・ 12回用(製品コード 635014)に添付
TCR a/b Human Indexing Primer Set HT for Illumina-48
・TCRa Human Primer 2 Reverse HT Index 1~4 (aR1~aR4; 12.5 μM)
・TCRb Human Primer 2 Reverse HT Index 1~4 (bR1~bR4; 12.5 μM)
・TCR Primer 2 Forward HT Index 1~12 (F1~F12; 12.5 μM)
・・・ 48回用(製品コード 635015)に添付
TCR a/b Human Indexing Primer Set HT for Illumina-96
・TCRa Human Primer 2 Reverse HT Index 1~8(aR1~aR8; 12.5 μM)
・TCRb Human Primer 2 Reverse HT Index 1~8 (bR1~bR8; 12.5 μM)
・TCR Primer 2 Forward HT Index 1~12 (F1~F12; 12.5 μM)
・・・ 96回用(製品コード 635016)に添付

保存

SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit Components
  Package 1:-70℃
  Package 2:-20℃
   10X Lysis Buffer は融解後4℃保存
   Elution Bufferは融解後室温保存
SeqAmp DNA Polymerase:-20℃
TCR a/b Human Indexing Primer Set HT for Illumina:-20℃

本製品以外に必要な試薬、機器(主なもの)

下記の製品は本キット中に含まれません。下記の製品はユーザーマニュアルに記載のProtocolで使用できることが確認されています。他製品では代替はできないため、ご注意ください。

PCR増幅およびバリデーション:
・First-Strand cDNA 合成専用のPCRサーマルサイクラー
・Double-Strand cDNA 増幅専用のPCRサーマルサイクラー
・High Sensitivity NGS Fragment Analysis Kit(Advanced Analytical社 Code DNF-474)
・DNA 1000 Kit(Agilent社 Code 5067-1504)
・ Nuclease-free thin-wall PCR tube(0.2 ml;USA Scientific社 Code 1402-4700)
・Nuclease-free low adhesion 1.5 ml tube(USA Scientific社 Code 1415-2600)またはLoBind tube(Eppendorf社 Code.022431021)

SPRI Bead精製:
・Agencourt AMPure PCR Purification Kit(5 ml Beckman Coulter社 Code A63880、60 ml Beckman Coulter社 Code A63881)-増幅cDNAの精製に使用する
・Small volume用Magnetic stand
・100% Ethanol
その他
・シングルチャンネルピペット: 10 μl、20 μlおよび200 μl
・8連チャンネルピペット: 20 μl、200 μl
・フィルターピペットチップ: 2 μl、20 μlおよび200 μl
・1.5 ml tube用minicentrifuge
・0.2 ml tubeまたはstrip用minicentrifuge

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注意事項
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