レンチウイルスベクター作製

※タカラバイオWEB会員でご希望の方には、再生／細胞医療・遺伝子治療サービスにかかわる様々な情報が満載の「再生／細胞医療・遺伝子治療サービスMail News」をお届けします。

• 国内の研究施設で実施
• タカラバイオ製品のpLVSINベクター、pLVproベクターを利用いただけます
• 安定発現細胞作製も承ります

1. 初代培養細胞、幹細胞、神経細胞、非分裂細胞を含むほぼ全ての哺乳類細胞に遺伝子導入できる。
2. 安定な遺伝子導入細胞株を得ることができる。
3. ヒト、マウスおよびラットを含む多くの動物細胞に遺伝子導入できる。
4. 動物個体に直接遺伝子導入できる。

• pLVSINベクター
  3'LTR/ΔU3のSIN型ベクターであるため、P2実験施設で使用可能です。
  mRNAを安定化するWPRE配列、ウイルスゲノムの核移行や宿主染色体への組換え効率を高めるcPPT配列などにより、高力価レンチウイルスの産生および導入遺伝子の発現レベルが向上したベクターです。
  Packaging MixはTatタンパク質発現プラスミドを含む「Lentiviral High Titer Packaging Mix」を用います。
  
• pLVproベクター
  pLVproベクターはpLVSINの5’LTRのU3領域をCMVプロモーターに置き換えたHIV-1 Tat非依存性の第三世代レンチウイルスベクターです（下図 ポイント①）。P2実験施設で使用可能です。
  pLVSINからHIV-1由来の配列を極限まで排除し安全性を高め（下図 ポイント②、③）、高力価のレンチウイルスベクター調製のためにパッケージングシステムを最適化したベクターです。コンポーネントが減った分、搭載可能な目的遺伝子の長さが5 kb（推奨）まで増えました。
  Packaging MixはTatタンパク質発現プラスミドを含まない「LVpro Packaging Mix」を用います。
  

フロー図

プラスミドDNA調製

• 目的の遺伝子を挿入した発現プラスミドDNA作製
• 挿入遺伝子のサイズ、挿入遺伝子（接続部位を含む）の塩基配列を確認
  ※pLVSIN-CMV、pLVSIN-EF1α Vector、pLVproシリーズを使用します。

薬剤耐性コロニー検出法による力価測定

• 薬剤による選択後、薬剤耐性コロニーを検出し、感染力価を測定
  ※ネオマイシン耐性コロニー検出法の標的細胞には、ヒトHT1080細胞を使用いたします。ウイルス力価として得られる数値は、ウイルス液1 mlあたりのネオマイシン耐性コロニー形成能を示します（Neomycin colony forming unit/ml）。

レンチウイルスベクターによる遺伝子安定発現細胞株作製

• レンチウイルスベクターの作製
• 標的細胞のセットアップ、レンチウイルスベクターによる遺伝子導入
• 薬剤耐性となった目的遺伝子導入プール細胞の調製
• リアルタイムPCRによる目的遺伝子の発現確認

レンチウイルスベクターの大量調製（ご希望のスケール）

ウイルスベクターの簡易濃縮（約100倍まで）または超遠心分離による精製（VSV-Gシュードタイプウイルス）

＊1 培養のスケールアップや精製方法など、ご相談により作業内容の変更が可能です。

＊2 目的遺伝子2種としてプラスミドDNA調製が2件発生する場合、調製費用が2件になります。

• レンチウイルスベクター液　約10 ml×2種類、参考タイター　10⁷～10⁹ copies/ml
• 作業報告書

• 以下のフォーマットにご記入のうえ、電子メールにてこちらへご送付下さい。
  
  • ウイルスベクター作製受託依頼書（Excel）
• 以下の手続きの後に実際のサービスを開始します。
  
  1. 挿入遺伝子に関する情報を開示ください。 ＜ 遺伝子情報書式用紙 ver.7 ＞
     タカラバイオの遺伝子組換え実験安全委員会への申請に必要な情報（遺伝子産物の性質、塩基配列等）をお知らせいただきます。
     電子ファイルに必要事項をご記載後、メールでお送りください。フラッシュメモリやCD-R等の媒体での郵送も受け付けます。
     なお、配列情報の郵送、メール送信の際には情報漏洩に充分ご注意ください。（弊社では責任を負いかねます）
     情報の扱いには十分注意を払っております。また、情報開示にあたり、秘密保持契約を必要とされる場合はご用意いたします。
  2. タカラバイオの安全委員会において、開示いただいた遺伝子情報をもとに、必要とされる物理的封じ込めレベルを判断し、折り返しご連絡させていただきます。
     P2レベル以下で扱うことができない遺伝子の場合、サービスをお断りすることになります。

• 本作業で作製したレンチウイルスベクターを商業目的で使用される場合には、個別にライセンス契約の締結が必要となる場合があります。
• レンチウイルスベクターの取り扱いは、挿入されている遺伝子の全塩基配列が既知で、かつ、その遺伝子が毒性あるいは病原性等を示さず安全であると判断できる場合に限りP2レベルで扱うことができます。本サービスでは、P2レベルで扱うことのできる場合のみ、ご依頼をお受けしています。
• お客様よりご提供いただいたサンプル・情報および納品物の複製物は、別途期限を定めている場合を除き、業務終了後3ヵ月を経過すると順次廃棄いたします。ご了承ください。