はじめに
令和元年9月19日に、厚生労働省医薬・生活衛生局生活衛生課長通知「公衆浴場における浴槽水等のレジオネラ属菌検査方法について」（薬生衛発0919第1号）が発出された。
これは、水質基準の項目の一つであるレジオネラ属菌の検査方法につき具体的な手順を示したもので、定量可能な迅速検査法（遺伝子検査法）としてLC EMA-qPCR法とqPCR法が収載された。
その中で、LC EMA-qPCR法の用途については、「迅速検査法のみで［レジオネラ属菌の］＊水質基準に適合しているか否かを判断する場合は、生菌の遺伝子を定量的に検出する方法（LC EMA-qPCR法）を用いる」と記載されている。
これは、水質基準の項目の一つであるレジオネラ属菌の検査方法につき具体的な手順を示したもので、定量可能な迅速検査法（遺伝子検査法）としてLC EMA-qPCR法とqPCR法が収載された。
その中で、LC EMA-qPCR法の用途については、「迅速検査法のみで［レジオネラ属菌の］＊水質基準に適合しているか否かを判断する場合は、生菌の遺伝子を定量的に検出する方法（LC EMA-qPCR法）を用いる」と記載されている。
＊ [ ] 内の文言は補足のためにタカラバイオで追記
LC EMA-qPCR法の原理について
LC EMA-qPCR法は
遺伝子検査法である。
EMA-PCR法に比べ、より確実でかつ高感度な
生菌検出法と言える。
- 液体培養（LC：Liquid Culture）による生菌の選択的増殖
- EMA処理による死菌由来DNAからのPCR増幅の抑制
遺伝子検査法である。
EMA-PCR法に比べ、より確実でかつ高感度な
生菌検出法と言える。
EMA-PCR法の原理について、詳しくはこちらをご覧ください
LC EMA-qPCR法による検査の流れ
LC EMA-qPCR法によるレジオネラ属菌検出は、2日間で結果判定ができる。1日目は、検水をろ過濃縮し、酸処理を行った後、液体培養を開始する。2日目は、EMA処理を行い、DNA抽出後、リアルタイムPCRによる検出を行う。
LC EMA-qPCR法の試薬フロー
ステップごとにLC EMA-qPCR用試薬をご用意しています。
| ステップ | 関連製品 | |
|---|---|---|
| 1 | 液体培養（LC） | Legionella LC Medium Base Ver.2（製品コード 9017） |
| 2 | EMA処理：EMAの浸透 | Viable Legionella Selection Kit for LC EMA-qPCR（製品コード 7730／7730S） |
| EMA処理：光照射 | LED Crosslinker 30（製品コード EM300) LED Crosslinker 12（製品コード EM200：終売) |
|
| 3 | DNA抽出 | Lysis buffer for Legionella Ver2（製品コード 9183） Lysis buffer for Legionella（製品コード 9181） |
| 4 | リアルタイムPCR | CycleavePCR Legionella（16S rRNA）Detection Kit（製品コード CY240／CY240S） |
| リアルタイムPCR装置 | Thermal Cycler Dice Real Time System III with PC（製品コード TP970） | |
| Thermal Cycler Dice Real Time System II（製品コード TP900、TP960：終売） | ||
| Thermal Cycler Dice Real Time System Lite（製品コード TP700、TP760：終売） | ||
| 参考 | EMA処理の成否チェック | Control Test Kit（Viable Bacteria Selection）（製品コード CY290） |
各ステップの操作方法を動画でご確認ください。
■ 厚生労働省通知に収載されたレジオネラ属菌の遺伝子検査法
| 分類 | 手法 | 用途 | 結果判定 | 検査法の特長 | 詳細 |
|---|---|---|---|---|---|
| 生菌 検出法 |
1 LC EMA-qPCR |
◎（レジオネラ属菌の） 水質基準適合判断※ ○スクリーニング検査 |
検査開始 2日目 |
液体培養（18時間）とEMA処理の組み合わせにより、生菌を選択的に検出できる | 詳しくは上記を ご覧ください |
| 生菌死菌 検出法 |
2 qPCR |
◎陰性確認 ○スクリーニング検査 |
検査開始 1日目 |
ろ過濃縮検体からqPCR検出を行う。死菌の存在も潜在的な汚染リスクとして評価できる | 詳しくは こちら |
※検査法は、各自治体の条例等で規定されている場合があります。
訪問説明・デモンストレーション申し込みボタン
※ 「第4版レジオネラ症防止指針」に収載されている「EMA-qPCR法」については、こちらのページをご参照ください。
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