TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1

本製品は、RNAをcDNAに変換した後にPCRを行う2ステップRT-PCRのためのキットであり、AMV（Avian Myeloblastosis Virus）由来のAMV RTase XLによるRNAからのcDNA合成、および長鎖増幅に適したTaKaRa LA TaqによるcDNAを鋳型としたPCR増幅を一本のチューブ内で行うことができる。本製品のOligo dT-Adaptor PrimerはpolyA⁺ RNAの3'末端からのcDNA合成をさらに効率良く行えるよう工夫されている。これにより3'-RACE法による未知の3'末端の増幅を効率良く行うことができる。

（100回分）^*1

AMV Reverse Transcriptase XL（5 U/μl）	50 μl
RNase Inhibitor （40 U/μl）	25 μl
Random 9 mers （50 pmol/μl）	50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer （2.5 pmol/μl）	50 μl
RNase Free dH2O	1 ml
TaKaRa LA Taq （5 U/μl）	25 μl
M13 Primer M4 （20 pmol/μl）	50 μl
10×RNA PCR Buffer*2	120 μl
10×LA PCR Buffer II （Mg2＋ Free）	500 μl
dNTP Mixture （各10 mM）	150 μl
MgCl2 （25 mM）	1 ml
Control F-1 Primer （20 pmol/μl）*3	25 μl
Control R-1 Primer （20 pmol/μl）*4	25 μl
Positive Control RNA （2×105 copies/μl）*5	25 μl

*1　[10 μl逆転写反応→50 μl PCR反応]の100回分
*2　100 mM Tris-HCl (pH8.3)、500 mM KCl
*3　Positive Control RNA用上流プライマー
*4　Positive Control RNA用下流プライマー
*5　pSPTet3プラスミドの転写polyA^＋ RNA

－20℃

RNAテンプレート	全般
増幅サイズ	少なくとも12 kbまでは増幅可能
逆転写酵素	AMV Reverse Transcriptase XL（42～60℃で逆転写可能）
DNA Polymerase	TaKaRa LA Taq
RNase Inhibitor	必要（キットに含まれる）
1st strand cDNA 合成用プライマー	Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer、特異的下流プライマーより選択可
3’-RACE法	RT時にOligo dT-Adaptor Primer、そしてPCR時にM13 Primer M4を使用することにより3’-RACE法に対応
操作	1本のチューブ内で反応可。熱処理により逆転写酵素活性を失活させた後、PCRを行う。

TaKaRa RNA LA PCR Kit（AMV）Ver.1.1は、AMV RTase XLによるRNAからのcDNA合成を行い、続けて同一チューブ内でTaKaRa LA Taq によるPCR増幅を行う。
RNAからcDNA合成を行う際のプライマーとしてRandom 9 mers、Oligo dT-Adaptor PrimerあるいはcDNAの下流部分の配列を有する特異的なプライマー（特異的下流プライマー）を用いることができる。3’-RACE法を行う際はOligo dT-Adaptor Primerを用いる。