※ 代表的なT7 promoter配列と転写開始点
IVT反応の鋳型DNAを調製する際の代表的なT7 promoter配列を下記に示します。転写開始点(+1 position)の塩基を “
T7 RNA Polymerase ver.2.0 (200 U/μl) | 20,000 U |
10× T7 RNA Polymerase Buffer | 1 ml |
40 mM | Tris-HCl (pH8.0) | |
8 mM | MgCl2 | |
2 mM | スペルミジン | |
5 mM | DTT | |
0.4 mM | ATP・UTP・CTP | |
0.4 mM | [3H]GTP | |
1 µg/50 µl | pT7-2 DNA |
滅菌精製水 | X µl |
10× T7 RNA Polymerase Buffer | 2 µl |
ATP, CTP, GTP, UTP | 各 10 mM |
Template DNA | 0.5~2 µg |
RNase inhibitor | 20 U |
T7 RNA Polymerase ver.2.0 | 200 U |
Total | 20 µl |
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