T7 RNA Polymerase, HQ

RNA医薬・ワクチン製造工程のプロセス開発時等に利用可能なHigh Quality（HQ）品

T7 RNA Polymerase ver.2.0（製品コード 2541A）と同等の高いRNA収量
ヒトまたは動物由来成分、およびβラクタム系化合物を最終組成液に含まない「High Quality（HQ）グレード製品」
RNA医薬開発等の基礎研究段階での利用に加え、非臨床試験や医薬品原料のGMP製造前のプロセス開発段階での利用に適しています。

品質グレードとは？（RUO/HQ/GMP）

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製品コード	メーカー略称	製品名	容量	価格（税別）	特記事項	説明書、CoA データシートベクター情報	参考資料	カート
Takara Code	メーカー略称	製品名	容量	価格（税別）	特記事項	説明書、CoA データシートベクター情報	参考資料	カート
2542A	TKR タカラバイオ（株）	T7 RNA Polymerase, HQ	200,000 U		2541Aと同等性能のHQグレード品 ★価格はお問い合わせください			個
2542A	TKR タカラバイオ（株）	T7 RNA Polymerase, HQ	200,000 U		2541Aと同等性能のHQグレード品 ★価格はお問い合わせください			個

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製品説明

T7 RNA Polymerase, HQは、ヒトまたは動物由来原料およびβラクタム系化合物を最終組成液に含まないHigh Quality（HQ）グレード試薬（研究用）です。本製品は、非臨床試験用の医薬品原薬の調製やGMPガイドラインに準拠する医薬品の製造プロセスの開発、また、RNA 医薬開発等の基礎研究に利用可能な製品です。

品質グレードとは？（RUO/HQ/GMP）

本酵素は、T7 promoter配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の領域を転写し、一本鎖RNAを合成します。
従来製品（RUOグレード）のT7 RNA Polymerase ver.2.0（製品コード 2541A）と同等の性能を有しており、添付の反応バッファーと組み合わせてin vitro transcription（IVT）反応に用いることで、高品質かつ大量のRNAが調製できます。

図1．RNA合成収量（RUOおよび他社品との比較）
CleanCap Reagent AG（TriLink社）を使用してFLuc RNAを合成した際の収量比較（200 μl反応系）
本製品およびT7 RNA Polymerase ver.2.0（製品コード 2541A）では高いRNA収量を示す。
T7 RNA Polymerase ver.2.0のRNA合成収量については製品ページをご参照ください。
使用例（20 μl反応系）はこちら

用途

＜医薬品原料開発＞
非臨床試験用mRNA原薬の調製
RNA医薬のプロセス開発

＜基礎研究＞
Cap analogを用いたcapped mRNAの合成
Long non-coding RNAの合成
guide RNAの合成
siRNA前駆体の合成
RT-qPCR用RNA標準鋳型の合成
高標識RNAプローブの合成

品質

本製品の最終組成液には、ヒトまたは動物由来成分、およびβラクタム系化合物は含まれません。

内容

T7 RNA Polymerase, HQ (200 U/μl)	200,000 U
10×IVT Reaction Buffer, HQ	10 ml

保存

－20℃

濃度

200 U/μl

起源

Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase

一般的性質

質量：約99.8 kDa
補因子：Mg²⁺

活性の定義

37℃において1時間に0.5 μgの1.9 kb FLuc RNAを生成する酵素量を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

1×IVT Reaction Buffer, HQ
10 mM ATP・CTP・GTP・UTP
1 μg/20 μl リニア化FLucプラスミドDNA

品質管理データ

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

注意事項

本酵素の激しい攪拌は行わないでください。
鋳型となる二本鎖DNAや試薬、反応に使用するチューブ、マイクロピペット用チップなどにRNaseが混入した場合、反応後に得られるRNAの収量が低下したり、RNAが断片化します。反応に使用するチューブ、マイクロピペット用チップは専用のものとし、反応を行うときはディスポーザブル手袋を着用して、RNaseが混入しないように注意してください。
均一な長さのRNAを合成するために、T7 promoterを含む線状化したプラスミドあるいはPCR産物などが鋳型DNAとして使用できます。線状化鋳型の3’末端は5’突出あるいは平滑末端が望ましいとされています。
10×IVT Reaction Buffer, HQにはスペルミジンが含まれています。スペルミジンは核酸と複合体を形成して、場合によっては不溶物質として沈殿する可能性がありますので、鋳型DNAは必ず酵素以外のコンポーネントの最後に加えるようにしてください。

使用例（約1.9 kbのRNA合成）

滅菌精製水	X µl
10×IVT Reaction Buffer, HQ	2 µl
ATP、CTP、GTP、UTP	各10 mM
Template DNA	0.5～2 µg
RNase inhibitor	20 U
T7 RNA Polymerase, HQ	200 U
Total	20 µl

37℃で1～2時間インキュベーションする。

Pyrophosphatase (inorganic), HQ（製品コード 2451A）を添加した場合のデータはこちら

技術情報

Application

HQ grade酵素で合成したmRNAの収量、および細胞へのmRNAトランスフェクション

使用文献・参考文献

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注意事項

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