反応性を飛躍的に高めたバージョンアップ品
反応用バッファー添付
- T7 RNA Polymerase（製品コード 2540A）の反応性を高めたバージョンアップ製品
- 既存品に比べて1反応（20 μl反応系）あたりのRNA合成収量が約7倍に向上
品質グレードとは？（RUO/HQ/GMP）
製品説明
T7 RNA Polymerase ver.2.0は、T7 RNA Polymerase（製品コード 2540A）の反応性を高めたバージョンアップ製品です。
本酵素はT7 promoter配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の領域を転写し、一本鎖RNAを合成します。
添付の反応バッファーと組み合わせてin vitro transcription（IVT）反応に用いることで、高品質かつ大量のRNAが調製できます。
また、既存品の T7 RNA Polymerase（製品コード 2540A）と比べて、1反応（20 μl反応系）あたりのRNA合成収量が約7倍に向上しています（図1）。
図1. FLuc RNA（約1.9 kb）を合成した際の本製品と従来品の収量比較（20 μl反応系）
本酵素はT7 promoter配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の領域を転写し、一本鎖RNAを合成します。
添付の反応バッファーと組み合わせてin vitro transcription（IVT）反応に用いることで、高品質かつ大量のRNAが調製できます。
また、既存品の T7 RNA Polymerase（製品コード 2540A）と比べて、1反応（20 μl反応系）あたりのRNA合成収量が約7倍に向上しています（図1）。
図1. FLuc RNA（約1.9 kb）を合成した際の本製品と従来品の収量比較（20 μl反応系）
※ 代表的なT7 promoter配列と転写開始点
IVT反応の鋳型DNAを調製する際の代表的なT7 promoter配列を下記に示します。転写開始点（＋1 position）の塩基を “
用途
- Cap analogを用いたcapped mRNAの合成
- Long non-coding RNAの合成
- guide RNAの合成
- siRNA前駆体の合成
- RT-qPCR用RNA標準鋳型の合成
- 高標識RNAプローブの合成
内容
| T7 RNA Polymerase ver.2.0 (200 U/μl) | 20,000 U |
| 10× T7 RNA Polymerase Buffer | 1 ml |
保存
－20℃
濃度
200 U/μl
起源
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase
一般的性質
- 質量：約99 kDa
- 補因子：Mg2+
活性の定義
37℃において1時間に1 nmolの[3H]GMPを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素量を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 40 mM | Tris-HCl (pH8.0) | |
| 8 mM | MgCl2 | |
| 2 mM | スペルミジン | |
| 5 mM | DTT | |
| 0.4 mM | ATP･UTP･CTP | |
| 0.4 mM | [3H]GTP | |
| 1 µg/50 µl | pT7-2 DNA |
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
注意事項
- 本酵素の激しい攪拌は行わないでください。
- 鋳型となる二本鎖DNAや試薬、反応に使用するチューブ、マイクロピペット用チップなどにRNaseが混入した場合、反応後に得られるRNAの収量が低下したり、RNAが断片化します。反応に使用するチューブ、マイクロピペット用チップは専用のものとし、反応を行うときはディスポーザブル手袋を着用して、RNaseが混入しないように注意してください。
- 均一な長さのRNAを合成するために、T7 promoterを含む線状化したプラスミドあるいはPCR産物などが鋳型DNAとして使用できます。線状化鋳型の3’末端は5’突出あるいは平滑末端が望ましいとされています。
- 10×T7 RNA Polymerase Buffer中にはスペルミジンが含まれています。スペルミジンは核酸と複合体を形成して、場合によっては不溶物質として沈殿する可能性がありますので、鋳型DNAは必ず酵素以外のコンポーネントの最後に加えるようにしてください。
- 本製品はNTPs（ATP, CTP, GTP, UTP）は含みません。Ribonucleoside 5'-Triphosphatesなどを別途ご用意ください。
使用例（約1.9 kbのRNA合成）
| 滅菌精製水 | X µl |
| 10× T7 RNA Polymerase Buffer | 2 µl |
| ATP, CTP, GTP, UTP | 各 10 mM |
| Template DNA | 0.5～2 µg |
| RNase inhibitor | 20 U |
| T7 RNA Polymerase ver.2.0 | 200 U |
| Total | 20 µl |
37℃で1～2時間インキュベーションする。
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- 注意事項
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