NucleoSpin^® 96 Plasmid Transfection-grade Plus

NucleoSpin 96 Plasmid Transfection-grade Plusは、トランスフェクションに使用可能なプラスミドDNAを取得できるハイスループットの精製キットです。5 mlまでの大腸菌培養液から、吸引法などでシリカメンブレンにDNAを結合させることでプラスミドDNAを96 well plate単位で精製できます。改良された新規カラムの採用により、従来品NucleoSpin 96 Plasmid Transfection-gradeと比較して結合容量が増加したことで、プラスミドDNAの最大収量が大幅に向上しました。さらに混入エンドトキシン量も従来品より抑制されており、サポートプロトコール（4回洗浄）の実施^＊により≦1 EU/μg DNAまで低減させることが可能です。精製プラスミドDNAは、H₂O-EFにより溶出されるため、トランスフェクションなど一般的な実験に直接使用できます。
＊サポートプロトコールの実施には、別途Detoxification Buffer ERB（製品コード 740495.500/.1000）のご準備が必要です。

図　精製プラスミドDNAの収量および純度

1.5 mlの大腸菌培養液からNucleoSpin 96 Plasmid Transfection-grade Plusまたは他社同等品を用いてプラスミドDNAを精製した。
溶出操作は各製品のプロトコールに従い、それぞれ2通りの溶出条件で実施した。NucleoSpin 96 Plasmid Transfection-grade Plusにより精製したプラスミドDNAの収量は、他社同等品と同等以上であった（A）。また、A₂₆₀/A₂₈₀およびA₂₆₀/A₂₃₀はいずれも他社同等品と同等であった一方で、エンドトキシン量は明確に低レベルであることが確認された（B）。

原理	シリカメンブレン法、エンドトキシン低減法
形状	96ウェルプレート
操作	手動または自動化装置、（吸引もしくは加圧式）
エンドトキシン量	≦10EU/μg DNA（標準プロトコール、3回洗浄） ≦1EU/μg DNA（サポートプロトコール、4回洗浄）
推奨する大腸菌培養液量	≦5 ml
プラスミドDNAサイズ	＜25 kb
回収量	15～50 μg
A260/A280	1.80～1.85
溶出液量	75～150 μl
精製時間	50分
結合容量	60 μg

Resuspension Buffer A1
Lysis Buffer A2
Neutralization Buffer A3
Detoxification Buffer ERB
Wash Buffer AQ (Concentrate)
H₂O-EF
RNase A (lyophilized)
NucleoSpin Plasmid Filter Plate (violet rings)
NucleoSpin Plasmid TG Plus Binding Plate (orange rings)
Culture Plate (including Gas-permeable Foil)
MN Wash Plate
Rack of Tube Strips

室温
（RNase Aを添加したBuffer A1は4℃で保存する。6ヵ月間安定）

※Buffer A2にはSDSが含まれているため、20℃以下で保存すると、沈殿が生じることがあります。
沈殿が生じた場合は、30～40℃で数分間、ボトルを保温し、完全に溶解した後にご使用ください。
Buffer ERBは結晶が生じることがあります。結晶が生じた際は、50～60℃に加熱しながら振盪し再溶解させてからご使用ください。加熱中は常にボトルを密閉してください。

試薬
・96～100％エタノール

器具
吸引法で使用する場合
・NucleoVac 96 Vacuum Manifold（製品コード 740681）などの吸引用マニフォールド

NucleoSpinはマッハライ・ナーゲル社の登録商標です。