Pyrophosphatase (inorganic), HQ

IVTでのRNA合成反応を促進し、収量向上に寄与するHQ grade酵素

Pyrophosphatase (inorganic)（製品コード 2450A）と同等の性能を有するIVT合成反応促進酵素
ヒトまたは動物由来成分、およびβラクタム系化合物を最終組成液に含まない「High Quality（HQ）グレード製品」
RNA医薬開発等の基礎研究段階での利用に加え、非臨床試験や医薬品原料のGMP製造前のプロセス開発段階での利用に最適

品質グレードとは？（RUO/HQ/GMP）

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製品コード	メーカー略称	製品名	容量	価格（税別）	特記事項	説明書、CoA データシートベクター情報	参考資料	カート
Takara Code	メーカー略称	製品名	容量	価格（税別）	特記事項	説明書、CoA データシートベクター情報	参考資料	カート
2451A	TKR タカラバイオ（株）	Pyrophosphatase (inorganic), HQ	1,000 U		2450Aと同等性能のHQグレード品 ★価格はお問い合わせください			個
2451A	TKR タカラバイオ（株）	Pyrophosphatase (inorganic), HQ	1,000 U		2450Aと同等性能のHQグレード品 ★価格はお問い合わせください			個

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製品説明

Pyrophosphatase (inorganic), HQは、ヒトまたは動物由来原料およびβラクタム系化合物を最終組成液に含まないHigh Quality（HQ）グレード試薬（研究用）です。本酵素は、非臨床試験用の医薬品原薬の調製やGMPガイドラインに準拠する医薬品の製造プロセスの開発、RNA医薬開発等の基礎研究に利用可能な製品です。

品質グレードとは？（RUO/HQ/GMP）

本酵素はPyrophosphatase (inorganic)（製品コード 2450A）と同等の性能を有しており、無機ピロリン酸（PPi）の加水分解を触媒してオルトリン酸を生成します^＊。したがって、RNAやDNAの合成反応で生じるピロリン酸を分解することで、合成反応を促進することが可能です。
in vitro transcription（IVT）反応においてT7 RNA Polymerase, HQ（製品コード 2542A）と併用した場合、高品質のRNAを大量に調製できるため、RNA医薬分野の研究開発での利用に適しています。

＊核酸合成反応中に生じる無機ピロリン酸inorganic pyrophosphate（=PPi）は、IVT反応液中のPolymerase の補因子であるMg²⁺と反応して沈殿物を生じ、合成反応を低下させてしまいます。Pyrophosphatase (inorganic) （=IPP）は、PPiを分解してオルトリン酸（H₃PO₄）とすることで、Polymerase活性に関わるMg²⁺の沈殿を防ぎ、合成反応を促進します。

（弊社比較データ）

図1．RNA合成収量（IPP添加あり／なしでの比較）

Firefly Luciferase (FLuc) mRNAをコードするDNA（製品コード 6144；構成品のPositive Control Template (FLuc)）をin vitro transcription（IVT）の鋳型に用いて、Pyrophosphatase (inorganic), HQ（以下IPP）の添加あり／なしによるIVTのRNA合成収量への影響を確認した。IVT反応におけるRNA合成酵素としてT7 RNA Polymerase, HQ（製品コード 2542A）を採用し、Cap付与型のmRNA合成時にはCapアナログ：CleanCap Reagent AG (3' OMe)（TriLink社）を使用した。IVT反応系へのIPP添加量は、終濃度として0.005 U/μlもしくは0.01 U/μlとなるように調製した。
結果として、Capあり／なしにかかわらず、IPPの添加によって2倍程度高いRNA合成収量を得られることが示された。

使用例（20 μl反応系）はこちら

用途

＜医薬品原料開発＞
非臨床試験用mRNA原薬の調製
RNA医薬のプロセス開発

＜基礎研究＞
in vitro transcription反応におけるRNA収量の向上
DNA増幅反応の促進

品質

本製品の最終組成液には、ヒトまたは動物由来成分、およびβラクタム系化合物は含まれません。

内容

Pyrophosphatase (inorganic), HQ (1 U/μl)　　　1,000 U

保存

－20℃

濃度

1 U/μl

起源

Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for Saccharomyces cerevisiae (yeast) inorganic pyrophosphatase

一般的性質

質量：約66 kDa（ホモダイマー）
補因子：Mg²⁺

活性の定義

25℃において、無機ピロリン酸から1分間に1 μmolのリン酸を生成する酵素量を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

100 mM Tris-HCl（pH7.2）
2 mM MgCl₂
2 mM inorganic pyrophosphate(PPi)

品質管理データ

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。
CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

注意事項

本酵素の激しい攪拌は行わないでください。

使用例

T7 RNA Polymerase, HQ（製品コード 2542A）を用いた場合の使用例を以下に示す。

滅菌精製水	X μl
10×IVT Reaction Buffer, HQ^＊	2 μl
ATP、CTP、GTP、UTP	各10 mM
Template DNA	0.5～2 μg
RNase inhibitor	20 U
T7 RNA Polymerase, HQ^＊	200 U
Pyrophosphatase (inorganic), HQ	0.1～0.2 U
Total	20 μl

37℃で1～2時間インキュベーションする。

＊ T7 RNA Polymerase, HQ（製品コード 2542A）のコンポーネント

技術情報

Application

HQ grade酵素で合成したmRNAの収量、および細胞へのmRNAトランスフェクション

使用文献・参考文献

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注意事項

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