組換えタンパク質の可溶化発現に
製品説明
大腸菌で異種タンパク質を発現させた場合、発現タンパク質が封入体（inclusion body）を形成したり、プロテアーゼによる分解を受けたりするケースがしばしば見られます。これは、発現タンパク質が正しく折りたたまれないことが原因である場合が多く、タンパク質機能研究の大きな障害となっています。
タンパク質の折りたたみには、それを介助する分子シャペロンの存在が知られており、in vitroでのタンパク質の折り畳みの機序を解明するため、多くの研究がなされています。
本セットに含まれる5種類のプラスミドは株式会社 HSP研究所で開発されたものであり、タンパク質の折りたたみに共同して働いていることが知られている複数の分子シャペロンが、それぞれひとつのプラスミド上にコードされ、シャペロンチームとして効率よく発現するよう設計されています。
これらのシャペロンチームのいずれかと、目的タンパク質を共発現することにより、従来封入体を形成していたタンパク質の可溶性画分への回収効率を高めることができます。
タンパク質の折りたたみには、それを介助する分子シャペロンの存在が知られており、in vitroでのタンパク質の折り畳みの機序を解明するため、多くの研究がなされています。
本セットに含まれる5種類のプラスミドは株式会社 HSP研究所で開発されたものであり、タンパク質の折りたたみに共同して働いていることが知られている複数の分子シャペロンが、それぞれひとつのプラスミド上にコードされ、シャペロンチームとして効率よく発現するよう設計されています。
これらのシャペロンチームのいずれかと、目的タンパク質を共発現することにより、従来封入体を形成していたタンパク質の可溶性画分への回収効率を高めることができます。
内容
| プラスミド | 濃度 | 液量 | シャペロン | プロモーター | インデューサー | 薬剤マーカー |
|---|---|---|---|---|---|---|
| pG-KJE8 | 10 ng/μl | 100 μl | dnaK-dnaJ-grpE groES-groEL |
araB Pzt1 |
L-Arabinose Tetracyclin | Cm |
| pGro7 | 10 ng/μl | 100 μl | groES-groEL | araB | L-Arabinose | Cm |
| pKJE7 | 10 ng/μl | 100 μl | dnaK-dnaJ-grpE | araB | L-Arabinose | Cm |
| pG-Tf2 | 10 ng/μl | 100 μl | groES-groEL-tig | Pzt1 | Tetracyclin | Cm |
| pTf16 | 10 ng/μl | 100 μl | tig | araB | L-Arabinose | Cm |
保存
－20℃
備考
| 1. |
本シャペロンプラスミドはpACYCの複製起点およびクロラムフェニコール耐性遺伝子（Cmr遺伝子）を利用しています。汎用されているColEIタイプのアンピシリン耐性遺伝子をマーカーとした大腸菌発現系には共存させて使用できますが、Cmr遺伝子を含むプラスミドや、クロラムフェニコール耐性を示す大腸菌宿主との組み合わせでは利用できません。例えば、pET システムなどで用いられる E. coli BL21（DE3）は宿主として使用できますが、Cmr遺伝子が挿入され、pACYCの複製起点を持つpLysSを保持する E. coli BL21（DE3）pLysSは利用できません。
|
| 2. |
本製品では、目的タンパク質とシャペロンとの共発現系を構築するため、まずシャペロンプラスミドで形質転換した大腸菌を作製し、その後、目的タンパク質の発現プラスミドで形質転換する2段階の方法を推奨しています。 Chaperone Competent Cells BL21シリーズが利用できます。したがって、シャペロンプラスミドで形質転換した大腸菌から、コンピテントセルを調製する必要があります。 |
DNAのシーケンスデータ
2020年12月9日に配列情報を修正しました。
コールドショック発現ベクター 製品ガイド
下記よりPDFでご覧いただけます。
 | 印刷物はこちらからご請求ください。（資料請求フォームへ） |
Protocols
Application
pCold™ I DNAとpG-Tf2との共発現による目的タンパク質の発現（可溶化促進例、発現・可溶化の成功例）
BIO VIEW / Clontechniques
使用文献・参考文献
関連製品・受託
Chaperone Competent Cells BL21シリーズ
TaKaRa Competent Cells BL21
pCold™ベクターシリーズ
pCold™ TF DNA
pCold™ GST DNA
pCold™ ProS2 DNA
DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞
TaKaRa DNA Ligation Kit LONG
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase
E. coli HST08 Premium Competent Cells
Protein Molecular Weight Marker
TALON® (Cobalt) レジン
- 注意事項
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