T7 RNA Polymerase ver.2.0

※ 代表的なT7 promoter配列と転写開始点
IVT反応の鋳型DNAを調製する際の代表的なT7 promoter配列を下記に示します。転写開始点（＋1 position）の塩基を “G” とすることが効率的なRNA合成には重要です。ただし、合成するRNA配列や5ʹ-cap修飾に使用するCapアナログの特徴に応じて鋳型をデザインする必要がありますので、目的に合わせて鋳型DNAをご準備下さい。

1. Cap analogを用いたcapped mRNAの合成
2. Long non-coding RNAの合成
3. guide RNAの合成
4. siRNA前駆体の合成
5. RT-qPCR用RNA標準鋳型の合成
6. 高標識RNAプローブの合成

• 質量：約99 kDa
• 補因子：Mg²⁺

1. 本酵素の激しい攪拌は行わないでください。
2. 鋳型となる二本鎖DNAや試薬、反応に使用するチューブ、マイクロピペット用チップなどにRNaseが混入した場合、反応後に得られるRNAの収量が低下したり、RNAが断片化します。反応に使用するチューブ、マイクロピペット用チップは専用のものとし、反応を行うときはディスポーザブル手袋を着用して、RNaseが混入しないように注意してください。
3. 均一な長さのRNAを合成するために、T7 promoterを含む線状化したプラスミドあるいはPCR産物などが鋳型DNAとして使用できます。線状化鋳型の3’末端は5’突出あるいは平滑末端が望ましいとされています。
4. 10×T7 RNA Polymerase Buffer中にはスペルミジンが含まれています。スペルミジンは核酸と複合体を形成して、場合によっては不溶物質として沈殿する可能性がありますので、鋳型DNAは必ず酵素以外のコンポーネントの最後に加えるようにしてください。
5. 本製品はNTPs（ATP, CTP, GTP, UTP）は含みません。Ribonucleoside 5'-Triphosphatesなどを別途ご用意ください。