T7 RNA Polymerase ver.2.0

反応性を飛躍的に高めたバージョンアップ品
反応用バッファー添付
  • T7 RNA Polymerase（製品コード 2540A）の反応性を高めたバージョンアップ製品
  • 既存品に比べて1反応（20 μl反応系）あたりのRNA合成収量が約7倍に向上
mRNA(IVT)製品ガイド
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製品コード メーカー
略称		 製品名 容量 価格（税別） 特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報		 参考資料 カート
Takara Code
2541A

TKR

タカラバイオ（株）
 T7 RNA Polymerase ver.2.0
20,000 U ￥43,000
 2540Aのバージョンアップ品 説明書・データシート・ベクター情報 個
2541A
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製品説明

T7 RNA Polymerase ver.2.0は、T7 RNA Polymerase（製品コード 2540A）の反応性を高めたバージョンアップ製品です。
本酵素はT7 promoter配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の領域を転写し、一本鎖RNAを合成します。
添付の反応バッファーと組み合わせてin vitro transcription（IVT）反応に用いることで、高品質かつ大量のRNAが調製できます。
また、既存品の T7 RNA Polymerase（製品コード 2540A）と比べて、1反応（20 μl反応系）あたりのRNA合成収量が約7倍に向上しています（図1）。
1反応あたりのRNA合成収量
図1. FLuc RNA（約1.9 kb）を合成した際の本製品と従来品の収量比較（20 μl反応系）

※ 代表的なT7 promoter配列と転写開始点
IVT反応の鋳型DNAを調製する際の代表的なT7 promoter配列を下記に示します。転写開始点（＋1 position）の塩基を “G” とすることが効率的なRNA合成には重要です。ただし、合成するRNA配列や5ʹ-cap修飾に使用するCapアナログの特徴に応じて鋳型をデザインする必要がありますので、目的に合わせて鋳型DNAをご準備下さい。
IVT反応の鋳型DNAを調製する際の代表的なT7 promoter配列

用途

  1. Cap analogを用いたcapped mRNAの合成
  2. Long non-coding RNAの合成
  3. guide RNAの合成
  4. siRNA前駆体の合成
  5. RT-qPCR用RNA標準鋳型の合成
  6. 高標識RNAプローブの合成

内容

T7 RNA Polymerase ver.2.0 (200 U/μl) 20,000 U
10× T7 RNA Polymerase Buffer 1 ml

保存

－20℃

濃度

200 U/μl

起源

Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase

一般的性質

  • 質量：約99 kDa
  • 補因子：Mg2+

活性の定義

37℃において1時間に1 nmolの[3H]GMPを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素量を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

40 mM   Tris-HCl (pH8.0)
8 mM   MgCl2
2 mM   スペルミジン
5 mM   DTT
0.4 mM   ATP･UTP･CTP
0.4 mM   [3H]GTP
1 µg/50 µl   pT7-2 DNA

品質管理データ

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

注意事項

  1. 本酵素の激しい攪拌は行わないでください。
  2. 鋳型となる二本鎖DNAや試薬、反応に使用するチューブ、マイクロピペット用チップなどにRNaseが混入した場合、反応後に得られるRNAの収量が低下したり、RNAが断片化します。反応に使用するチューブ、マイクロピペット用チップは専用のものとし、反応を行うときはディスポーザブル手袋を着用して、RNaseが混入しないように注意してください。
  3. 均一な長さのRNAを合成するために、T7 promoterを含む線状化したプラスミドあるいはPCR産物などが鋳型DNAとして使用できます。線状化鋳型の3’末端は5’突出あるいは平滑末端が望ましいとされています。
  4. 10×T7 RNA Polymerase Buffer中にはスペルミジンが含まれています。スペルミジンは核酸と複合体を形成して、場合によっては不溶物質として沈殿する可能性がありますので、鋳型DNAは必ず酵素以外のコンポーネントの最後に加えるようにしてください。
  5. 本製品はNTPs（ATP, CTP, GTP, UTP）は含みません。Ribonucleoside 5'-Triphosphatesなどを別途ご用意ください。

使用例（約1.9 kbのRNA合成）

滅菌精製水 X µl
10× T7 RNA Polymerase Buffer 2 µl
ATP, CTP, GTP, UTP 各 10 mM
Template DNA 0.5～2 µg
RNase inhibitor 20 U
T7 RNA Polymerase ver.2.0 200 U
Total 20 µl

37℃で1～2時間インキュベーションする。

mRNA合成（in vitro Transcription）製品ガイド

使用文献・参考文献

関連製品・受託

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TransIT®-mRNA Transfection Reagent
Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
mRNA作製

注意事項
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