Guide-it™ Recombinant Cas9 (10 μg/μl)

高濃度でエレポに最適なCas9タンパク質
  • エレクトロポレーションによる導入に最適な高濃度Cas9タンパク質溶液
  • ベクター導入システムに比べてオフターゲット効果を抑制
  • Guide-it Complete sgRNA Screening Systemとの組みあわせで高効率のゲノム編集が可能
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
632678

CLN

Clontech
Guide-it™ Recombinant Cas9 (10 μg/μl)
NEW ライセンス
200 μg ¥40,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2678N
632679

CLN

Clontech
Guide-it™ Recombinant Cas9 (10 μg/μl)
NEW ライセンス
500 μg ¥75,000
説明書・データシート・ベクター情報
Z2679N
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製品説明

Guide-it Recombinant Cas9(10 μg/μl)は、野生型Streptococcus pyogenes由来のCRISPR/Cas9ゲノム編集用の組換えCas9タンパク質溶液である。従来品(3 μg/μl)よりもCas9タンパク質濃度が高濃度となっており、sgRNAとの複合体(RNP)形成の際の操作性が向上している。
Cas9遺伝子を使用するベクター導入システムに比べ、遺伝子の残存によるCas9の継続的な発現がないため、オフターゲット効果を抑制できる。
また、タンパク質への転写・翻訳・発現の過程がなく、C末にNLS(核移行シグナル)が付加されているため、迅速かつ効率よく変異導入が行える。
sgRNAの調製にはGuide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit(製品コード 632635)もしくはGuide-it Complete sgRNA Screening System(製品コード 632636)の使用を推奨する。

3 μg/μl濃度のCas9タンパク質Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) (製品コード 632641/632640)はこちら

濃度

10 μg/μl(グリセロール濃度は50%)

保存

-20℃

本製品以外に必要なもの(主なもの)

実験例

hiPS細胞における遺伝子のノックアウトおよび他社Cas9との比較
図1. hiPS細胞における遺伝子のノックアウトおよび他社Cas9との比較
Guide-it Recombinant Cas9とGuide-it sgRNA In Vitro Transcription Kitを用いて作製したsgRNAをエレクトロポレーションで導入して、各ターゲット遺伝子のゲノム編集実験を行った。
変異導入効率の確認にはGuide-it Mutation Detection Kit(製品コード 631448)を使用し、各%は切断効率を示している。

人工多能性幹細胞におけるCD81遺伝子のノックアウト
図2. 人工多能性幹細胞におけるCD81遺伝子のノックアウト
人工多能性幹細胞株hiPSC-18とhiPSC-22にGuide-it Recombinant Cas9とGuide-it sgRNA In Vitro Transcription Kitを用いて作製したsgRNAをエレクトロポレーションで導入して、CD81遺伝子のノックアウトを実施した。
抗体染色後のFACSの結果より、エレクトロポレーション10日後のノックアウト効率はhiPS-18で91%、hiPSC-22で85%となり、非常に高い導入効率を示した。

AAVS1およびCXCR4遺伝子の相同組換え(HDR)効率
図3. AAVS1およびCXCR4遺伝子の相同組換え(HDR)効率
Hind III切断サイトを含んだRepair OligoをAAVS1 geneに、また、Hind IIIおよびBamH I切断サイトを含んだRepair OligoをCXCR4 geneにノックインするため、本製品を使用してエレクトロポレーションでCD34造血幹細胞への導入実験を行った。
細胞内の各ターゲット遺伝子をPCRで増幅し、各制限酵素で切断して挿入効率を確認した。
(CXCR4には編集前の野生型の遺伝子にBamH Iサイトが1ヵ所ある。)
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