mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase

mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase（2’-O-MTase）は、vacciniaウイルス由来のメチル化酵素であり、5’末端に7-methylguanylate cap (m⁷G cap) 構造（Cap 0）を持つRNAの1番目のヌクレオチドの2’-O部位を特異的にメチル化し、Cap 1構造を付与します。Cap 1構造を持つRNAは、生体内において自然免疫応答を回避するのに役立ち、翻訳を促進することが知られています。本製品には反応バッファーとメチル基供与体としてのS-adenosylmethionine (SAM)が含まれており、高効率にCap-0 RNAからCap-1 RNAを調製できます。
また、本酵素をVaccinia Capping Enzyme（製品コード 2460A/B）と同時に用いることで、キャップ化されていないRNA（5’-triphosphate RNA）からCap 1構造を持つRNAを直接シングルステップ反応で調製することもできます（使用例-2をご参照ください）。

mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase (50 U/μl)	2,500 U
10× Capping Buffer	100 μl
S-adenosylmethionine (SAM) (32 mM)	100 μl

－20℃

50 U/μl

Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for vaccinia virus mRNA cap 2’-O-methyltransferase

質量：約40 kDa

37℃において1時間に10 pmolのCap-0 RNAをメチル化する酵素量を1 Uとする。

1×		Capping Buffer
1 mM		DTT
13.75 μCi/ml		[3H]SAM
2 μg/50 μl		100 nt Cap-0 RNA

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

*1	使用するRNAは5’末端が複雑な2次構造を取る場合に備え、反応前に熱変性する。 ＜熱変性＞ (1) 精製RNA 10 μgをRNase-free waterで16 μl（Cap-0 RNAからCap-1 RNAの調製）あるいは14 μl（uncapped RNAからCap-1 RNAの調製）に調製する。 (2) 65℃、5～10分で熱変性した後、5分氷冷する。
*2	SAMは不安定であるため、反応前に必要分を32 mMのストック溶液からRNase-free waterで希釈調製する。希釈液は反応まで氷上で保存する。
*3	必要に応じてスケールアップ可能。
*4	RNAの長さが200 nt以下である場合は、メチル化効率（およびcap付加効率）を上げるため反応時間を延長する（1時間→2時間）。

注：	反応液中のRNAを安定的に保つため、RNase inhibitorが使用できます。使用する場合は、最終濃度が1 U/μlとなるように添加してください。