dsRNAの大幅な低減と高いキャッピング効率を実現するT7 RNA Polymerase改変体【GMP grade製品】
- PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA)（製品コード 2560A）のGMP grade製品
- GMPに関する各種ガイドライン（ICH Q7、PIC/S GMP）を参照した管理基準に沿って製造管理および品質管理
- ヒトまたは動物由来原料、およびβ-ラクタム系化合物を不使用
- in vitro transcription（IVT）でのRNA合成時に、dsRNA生成を大幅に抑制し、生体投与時の免疫原性を低減
- CleanCap Reagent AGなどのCapアナログと組み合わせることで、効率的なキャッピングと高いRNA収量を実現
製品説明
PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA) GMP gradeは、Capアナログ依存的RNA合成、低dsRNA生成、および耐熱性（～52℃）の特長を併せ持つ、T7 RNA polymerase＊1の改変体です。本酵素とCleanCap Reagent AG（TriLink社）などCapアナログ、10X IVT Reaction Buffer GMP grade（製品コード T2401S010ほか・別売）を使用したin vitro transcription（IVT）では、免疫原性のあるdsRNAの生成を大幅に低減しつつ、高いCap付加効率で高品質なmRNAを大量に調製できます。
＊1 T7 promoter配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の領域を転写し、in vitroで一本鎖RNAを合成する酵素
反応例
FLuc mRNAでの合成収量およびdsRNA生成の抑制効果（PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA)（製品コード 2560A））詳細はこちら
＊1 T7 promoter配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の領域を転写し、in vitroで一本鎖RNAを合成する酵素
反応例
FLuc mRNAでの合成収量およびdsRNA生成の抑制効果（PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA)（製品コード 2560A））詳細はこちら
用途
- Capアナログを使用したcapped mRNAの合成（共転写キャッピング）
- 酵素的キャッピングに使用するmRNAの合成
※RNA収量はCapアナログ使用時と比べ、5～30％減少する場合があります。
商用生産用途での利用に際し、供給等に関わる契約を検討されている場合、別途ご相談ください。お問い合わせはこちら
品質
- 本製品は、GMPに関する各種ガイドライン（ICH Q7、PIC/S GMP）を参照した管理基準に沿って、製造および品質管理されています。詳細はこちら
品質グレードとは？（RUO/HQ/GMP） - 本製品はヒトまたは動物由来原料を含んでおりません。
- 本製品はβ-ラクタム系化合物不使用の一次原料を採用しています。
品質保証文書の提供
Certificate of Origin (CoO)、Statement of compliance (SOC)、β-ラクタム系化合物不使用等の証明を発行します。発行のご希望や証明書の種類に関するご要望については、別途ご相談ください。
内容
■酵素
PrimeCap T7 RNA Polymerase GMP grade（製品コード T2422S001） 200 KU
■バッファー
10X IVT Reaction Buffer GMP grade（製品コード T2401S010） 10 ml
※本GMP grade製品では、酵素およびバッファーは個別に販売され、酵素・バッファーのセット品はございませんのでご注意ください。
PrimeCap T7 RNA Polymerase GMP grade（製品コード T2422S001） 200 KU
■バッファー
10X IVT Reaction Buffer GMP grade（製品コード T2401S010） 10 ml
※本GMP grade製品では、酵素およびバッファーは個別に販売され、酵素・バッファーのセット品はございませんのでご注意ください。
保存
－20℃±5℃
有効期限
CoAおよび製品ラベルをご覧ください。（詳細はお問い合わせください。）
濃度
200 U/μl
起源
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase variant
一般的性質
質量：約99.8 kDa
補因子：Mg2＋
補因子：Mg2＋
活性の定義
37℃において1時間に0.25 μgの1.9 kb FLuc RNAを生成する酵素量を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
1X IVT Reaction Buffer GMP grade
10 mM ATP・CTP・GTP・UTP
0.9 μg/20 μl リニア化 FLuc プラスミド DNA
10 mM ATP・CTP・GTP・UTP
0.9 μg/20 μl リニア化 FLuc プラスミド DNA
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはこちらからダウンロードできます。
注意事項
- 本酵素の激しい攪拌は行わないでください。
- RNaseが混入しないように注意してください。RNaseが混入した場合、反応後に得られるRNAの収量が低下したり、RNAが断片化したりする場合があります。
- 均一な長さのRNAを合成するために、T7 promoterを含む線状化したプラスミドあるいはPCR産物などが鋳型DNAとして使用できます。線状化鋳型の3’末端は5’突出あるいは平滑末端が望ましいとされています。
- 10X IVT Reaction Buffer GMP gradeにはスペルミジンが含まれています。スペルミジンは核酸と複合体を形成して、場合によっては不溶物質として沈殿する可能性がありますので、鋳型DNAは必ず酵素以外のコンポーネントの最後に加えるようにしてください。
使用例（約1.9 kbのRNA合成）
| 滅菌精製水 | X μl |
| 10X IVT Reaction Buffer GMP grade | 2 μl |
| ATP、CTP、GTP、UTP＊1 | 各 10 mM |
| CleanCap Reagent AG (3’ OMe) ＊2 | 4 mM |
| Template DNA | 0.5～2 μg |
| RNase Inhibitor | 20 U |
| Pyrophosphatase (inorganic) | 0.1 U |
| PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA) GMP grade | 200 U |
| Total | 20 μl |
37℃で1～2時間インキュベーションする。
＊1 修飾NTPを使用する場合は、対応するNTPを等量で置き換える。
＊2 CleanCap Reagent AG (3’ OMe)（TriLink社 Code. N-7413-1/5/10等）
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- 注意事項
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