ノックアウト/ノックイン細胞の取得に

ゲノム編集による細胞株作製

■お問い合わせ窓口(B)

TEL:077-565-6999


[サンプル送付先]
タカラバイオ株式会社 CDMセンター 細胞工学研究 受託受付担当 宛て
〒525-0058 滋賀県草津市野路東七丁目4番38号
TEL:077-567-9262
ご注意:伝票の品名に受託名をご記載ください。 お問い合わせフォームは こちら

特長

  • CRISPR/Cas9システムを利用したノックアウト/ノックイン細胞作製
  • sgRNA、Cas9発現プラスミド(dRGEN)の構築からも承ります
  • iPS細胞のゲノム編集も承ります

概要

RGEN(RNA guided endonuclease)はバクテリアの獲得免疫システムであるCRISPR/Cas9システム由来のRNA誘導型人工ヌクレアーゼで、従来型の人工ヌクレアーゼとは異なり、ガイドRNA(gRNA:guide RNA)とCas9エンドヌクレアーゼ(タンパク質)の二つの異なる分子が、標的DNA配列の認識とDNA二本鎖切断の働きをそれぞれ別々に担います。こうした特徴から、従来型人工ヌクレアーゼに対しRGENの設計が比較的容易である一方、本法は、従来技術と同等のゲノム編集効果が得られること、ならびに、複数箇所の同時ゲノム編集が容易に行えることなどから、新たなゲノム編集法として注目を集めています。
本サービスは、ゲノムへの変異導入を目的にCRISPR/Cas9システムにて設計した組換えCas9タンパク質及びsgRNAを用いて、供与いただいた細胞の遺伝子ノックアウト/ノックイン細胞の作製受託サービスを承ります。
■チラシをご覧ください。
ゲノム編集受託サービス

サービス内容

  • CRISPR/Cas9システムを利用したノックアウト細胞の作製
    お客様から提供いただく任意の哺乳動物細胞に、sgRNAおよびCas9タンパク質の複合体 (RNP)をトランスフェクションします。トランスフェクション後のプール細胞について、Guide-it Mutation Detection Kit(製品コード 631443/631448)を用いたアッセイによりターゲット特異的にDNAの切断、変異導入が生じたことを確認します。そのプール細胞からシングルクローン化した細胞について、ダイレクトシーケンスを行い、シーケンス結果を納品します。

    ノックアウト細胞の作製の流れ

  • CRISPR/Cas9システムを利用したノックイン細胞の作製
    お客様からご提供いただく任意の哺乳動物細胞に、sgRNAおよびCas9タンパク質の複合体(RNP)、および目的遺伝子挿入用ssOligo DNAをトランスフェクションします。トランスフェクション後のプール細胞について、Guide-it Mutation Detection Kit(製品コード 631443/631448)を用いたアッセイによりターゲット特異的にDNAの切断、変異導入が生じたことを確認します。そのプール細胞から限界希釈法等によりシングルクローン化します。シングルクローン化した細胞についてダイレクトシーケンスを行い、シーケンス結果を納品します。また、ドナープラスミドを用いたノックイン細胞作製も承ります。取得したクローンについてPCR解析による変異導入の有無確認を行います。
    オプションとして、ウェスタンブロット解析やクローニングによるシーケンス解析なども承ります。
    Cas9ヌクレアーゼに代えてCas9ニッカーゼを用いたゲノム編集細胞作製も承ります。ニッカーゼの利用により、オフターゲットリスクの低減が期待できます。


    sgRNA(single-guide RNA)発現プラスミドDNA(U6プロモーター)、Cas9タンパク質発現プラスミドDNA(CMVプロモーターまたはEF1αプロモーター)、目的遺伝子挿入用ドナープラスミドDNA、およびssOligo DNAの設計・合成も承ります。
【オプションサービス】
  • TAクローニング&シーケンス解析
  • ウェスタンブロット解析
  • オフターゲット領域予測
  • エクソームシーケンス解析による変異確認

ノックアウト/ノックイン細胞株の作製フロー

価格・納期

サービス項目 参考価格 参考納期
ノックアウト細胞作製*1 ¥2,800,000  1件あたり 4.5ヵ月~
ノックイン細胞作製、一塩基置換変異導入細胞作製等 別途ご相談
ウェスタンブロット解析)*2 ¥350,000~ 10クローン
あたり
2~3週間
TAクローニングによるシーケンス解析) ¥480,000~ 5クローン
あたり
4週間
*1 株化細胞での下記作業仕様での参考価格です。iPS細胞など、細胞種によって費用が異なりますのでお問い合わせください。
<作業仕様>
  -sgRNA作製
  -細胞のセットアップ(起眠、継代維持、マイコプラズマ簡易試験等)
  -各種条件検討、目的の編集領域配列確認
  -プール細胞でのゲノム編集確認
  -細胞株作製(~40クローン)、ゲノム編集確認
  -クローン調製
*2 ウェスタンブロット解析は解析用の一次抗体、二次抗体のご提供をお願いします。

・価格・納期は手法や細胞により異なりますので、別途ご相談ください。

納品物

  • 作業報告書
  • ノックアウト/ノックイン細胞クローンの凍結ストック
  • 解析データ(塩基配列データ等)

ご注文方法

以下のフォーマットにご記入のうえ、依頼書記載のFAX番号へご送付ください。

受入サンプル

  • 細胞
  • 培地
  • 遺伝子情報/ターゲットサイト情報

ご留意事項

ヒト生体試料の解析にあたり、個人情報に関わるサンプルは、お客様ご所属施設の倫理委員会等で遺伝子解析研究に用いられることの承認が得られており、かつお客様の元で匿名化されたものに限らせていただきます。
詳しくは、「ヒトゲノム・遺伝子解析受託サービスについて」をお読みください。
お客様よりご提供いただいたサンプル・情報および納品物の複製物は、別途期限を定めている場合を除き、業務終了後3ヵ月を経過すると順次廃棄いたします。ご了承ください。

ライセンス情報

K102 Patent application
This product (“Product”) and its use, is the subject of U.S. Patents 8,697,359 and 8,771,945 and pending U.S. Patent applications. The purchase of the Product conveys to the buyer the non-transferable right to use Product(s) purchased from Takara Bio USA, Inc. or its Affiliates, and any progeny, modification or derivative of a Product, or any cell or animal made or modified through use of a Product, or any progeny, modification or derivative of such cell or animal (“Related Material”), solely for research conducted by the buyer in accordance with all of the following requirements. No right is given to use this Product or Related Material for any other purpose, including, but not limited to, use in drugs, in vitro diagnostic purposes, therapeutics, or in humans. The buyer shall not sell or otherwise transfer Products (including without limitation any material that contains a Licensed Product in whole or part) or any Related Material to any other person or entity, or use Products or any Related Material to perform services for the benefit of any other person or entity, (ii) the buyer shall use only the purchased amount of the Products and components of the Products, and shall use any Related Material, only for its internal research and not for (a) the practice, performance or provision of any method, process or service, or (b) the manufacture, sale, use, distribution, disposition or importing of any product, in each case (a) or (b) for consideration, or on any other commercial basis (“Commercial Purpose”), (iii) the buyer shall use Licensed Products and any Related Material in compliance with all applicable laws and regulations, including without limitation applicable human health and animal welfare laws and regulations, and (iv) the buyer shall indemnify, defend and hold harmless MIT, Harvard and The Broad and their current and former trustees, directors, officers, faculty, affiliated investigators, students, employees, and agents and their respective successors, heirs and assigns (“Indemnitees”), against any liability, damage, loss, or expense (including without limitation reasonable attorneys’ fees and expenses) incurred by or imposed upon any of the Indemnitees in connection with any claims, suits, investigations, actions, demands or judgments arising out of or related to the exercise of any rights granted to the buyer, or any breach of the rights granted hereunder by the buyer.

この製品を見た人は、こんな製品も見ています。

注意事項
  • 本受託サービスは、すべて研究目的として作業を行います。納品物を試験研究目的以外へご使用される場合、弊社では納品物に起因する損失・損害等については一切の責任を負いかねます。納品物によっては、その構成物(例えば、ベクター、蛍光色素など)の使用に制限がある場合がありますのでご注意ください。
  • 納品物に起因して、直接的もしくは間接的に発生したお客様の損害については、明らかに弊社の責に帰すべき事由による場合を除いて、弊社は一切その責任を負いません。

▲このページのトップへ