PrimeScript Double Strand cDNA Synthesis Kit｜タカラバイオ株式会社

二本鎖cDNA合成

PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit

メーカー略称	製品コード	TaKaRa Code	製品名	容量	価格（税別）	特記事項	説明書データシートベクター情報	参考資料
TKR	6111A	6111A	PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit	10回	￥56,000

逆転写酵素PrimeScriptシリーズのご紹介

製品説明

本キットは、主に動植物由来のpolyA^＋ RNA より、二本鎖cDNAを合成するためのキットである。
本キットの構築はGubler-Hoffman の方法^1）に基づいている。システム原理を以下に示す（図1、2参照）。

PrimeScript RTase とOligo (dT)₁₈ PrimerあるいはRandom Primerを用いて1st strand cDNAを合成する。
E. coli RNase Hで、mRNA-cDNAハイブリッド中のRNAにニックを入れて、E. coli DNA Polymerase I とE. coli DNA Ligaseのシステムにより、RNA鎖をDNA鎖に置き換えていき、2nd strand DNAを合成する。
T4 DNA Polymeraseにより、末端の平滑化を行う。

内容

（10回）

PrimeScript RTase（200 U/μl）	10 μl
RNase Inhibitor（40 U/μl）	10 μl
Oligo (dT)₁₈ Primer（1 μg/μl）	20 μl
Random Primer（9 mer）（0.3 μg/μl）	20 μl
5×1st Strand Synthesis Buffer	40 μl
dNTP Mixture（各10 mM）	40 μl
E. coli RNase H / E. coli DNA Ligase Mixture	20 μl
E. coli DNA Polymerase I（20 U/μl）	20 μl
5×2nd Strand Synthesis Buffer	300 μl
T4 DNA Polymerase（1 U/μl）	40 μl
RNase free dH₂O	600 μl×2
Control RNA（1 μg/μl）^＊	5 μl

＊

本キットに添付されているControl RNAは、SP6 promoter領域の下流にpBR322由来のテトラサイクリン耐性遺伝子を含む約1.4 kbの断片を挿入したプラスミドpSP Tet3を鋳型にして、SP6 RNA Polymeraseを用いてin vitro transcriptionにより合成したものである。このControl RNAは、30個のアデニン塩基よりなるpolyA tailを持つ鎖長約1.4 kbのpolyA^＋ RNAで、このRNAを鋳型に二本鎖cDNAを合成して、適切なプラスミドに挿入した際この二本鎖cDNAがfull-lengthのものであれば、このプラスミドはテトラサイクリン耐性になる。