抗Taq抗体と結合させたTaKaRa Taq™
反応用バッファー添付＋dNTP
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製品説明
TaKaRa Taqは、Thermus aquaticus DNA Polymerase遺伝子をクローニングして改変したものを大腸菌にて大量に発現させ、高度に精製した分子量94 kDaの耐熱性DNAポリメラーゼである。天然のTaq DNA Polymeraseと同じ機能を有する。
本製品で使用しているTaKaRa Taq HSは、抗Taq抗体とTaKaRa Taqを混合したもので、ホットスタートPCR用の酵素である。高温に加熱するまでは抗Taq抗体が酵素に結合しポリメラーゼ活性を抑えているため、サイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができる。抗Taq抗体はPCRの最初のDNA変性ステップで変性するため、特別な変性ステップは必要なく、従来のPCR条件で使用できる。
※ウラシルを含むDNAを鋳型とする場合や、チミンの代わりにウラシルを含む基質を用いた場合のPCR反応には、本酵素の使用を推奨する。
本製品で使用しているTaKaRa Taq HSは、抗Taq抗体とTaKaRa Taqを混合したもので、ホットスタートPCR用の酵素である。高温に加熱するまでは抗Taq抗体が酵素に結合しポリメラーゼ活性を抑えているため、サイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができる。抗Taq抗体はPCRの最初のDNA変性ステップで変性するため、特別な変性ステップは必要なく、従来のPCR条件で使用できる。
※ウラシルを含むDNAを鋳型とする場合や、チミンの代わりにウラシルを含む基質を用いた場合のPCR反応には、本酵素の使用を推奨する。
内容
（250 U）
| TaKaRa Taq HS （5 U/μl） | 50 μl |
| 10×PCR Buffer （Mg2+ plus） | 1 ml |
| dNTP Mixture （各2.5 mM） | 800 μl |
保存
－20℃
形状
| 20 mM | Tris-HCl （pH8.0） |
| 100 mM | KCl |
| 0.1 mM | EDTA |
| 1 mM | DTT |
| 0.5％ | Tween 20 |
| 0.5％ | NP-40 |
| 50％ | Glycerol |
添付10×PCR Buffer組成
| 100 mM | Tris-HCl（pH8.9） |
| 500 mM | KCl |
| 15 mM | MgCl2 |
添付dNTP Mixture*
| 濃度 | 各2.5 mM |
| 形状 | 水溶液（ナトリウム塩）pH7～9 |
| 純度 | 各98％以上 |
* dATP、dCTP、dGTP、dTTPの等モル混合物で、希釈せずにそのままPCR反応に用いることができる。
活性の定義
活性化サケ精子DNAを鋳型 /プライマーとして用い、下記の活性測定用反応液中にて74℃において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。
活性測定用反応液組成
| 25 mM | TAPS緩衝液（pH9.3、25℃） |
| 50 mM | KCl |
| 2 mM | MgCl2 |
| 0.1 mM | DTT |
| 各200 μM | dATP・dGTP・dCTP |
| 100 μM | [3H]-dTTP |
| 0.25 mg/ml | 活性化サケ精子DNA |
純度
●10 Uの本酵素と0.6 μgのλ-Hind III分解物とを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのsupercoiled pBR322 DNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのλDNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのsupercoiled pBR322 DNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのλDNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
用途
PCR法によるDNA増幅
PCR産物について
TaKaRa Taq HSを用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にAが1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-Vector［pMD20（製品コード 3270）、pMD19(Simple)（製品コード 3271）など］にクローニングすることができる。
また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。
また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。
品質管理データ
性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。
一般的なPCR反応液量（Total 50 μl）
| TaKaRa Taq HS（5 U/μl） | 0.25 μl |
| 10×PCR Buffer（Mg2+ plus） | 5 μl |
| dNTP Mixture（各2.5 mM） | 4 μl |
| Template | ＜500 ng |
| Primer 1 | 0.2～1.0 μM （final conc.） |
| Primer 2 | 0.2～1.0 μM （final conc.） |
| 滅菌精製水 | up to 50 μl |
補足資料
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